工厂化育苗.docx

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工厂化育苗复习材料
提示:本材料只包含65分的考试题目,其他的35分需要大家自己多看看书、笔记和ppt。
1、褐变:指对于富含多酚化合物的植物,在接种时由于切割或剥离使组织收到损害,该类物质会在多分氧化酶的作用下氧化褐变,是培育基变黑,并严峻抑制外植体生长和分化,严峻时导致培育物死亡。
2、玻璃化现象:指组织培育中,呈现半透亮状的畸形试管植物,这类植物被称为“玻璃化苗”。在离体培育中,再生植株长成玻璃苗的现象,被称做玻璃化作用。
3、胚状体:在离体培育条件下,植物离体培育的细胞、组织、器官也可以产生类似胚的构造,其形成也经了一个类似胚胎的发生和发育过程,这种类似胚的构造称为胚状体
4、植物组织培育:植物组织培育〔planttissueculture〕是指无菌和人工掌握的环境条件下,利用适当的培育基,对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进展培育,使其再生细胞或完整植株的技术与方法,通常又称为植物离体培育
5、植物细胞全能性:每一个植物细胞带有该植物的全部遗传信息,在适当条件下可表达出该细胞的全部遗传信息,分化出植物有机体全部不同类型的细胞,形成不同类型的器官甚至胚状体,直至形成完整再生植株。
6、污染:污染是指在组培过程中,由于真菌、细菌等微生物的侵染,在培育容器中滋生大量菌斑,使培育材料不能正常生长和发育的现象。
7、植物无糖组培快繁技术:又称为光自养微生殖技术,是指在
植物组织培育中转变碳源的种类,以CO2代替糖作为植物体的碳源,通过输入CO2气体作为碳源,并掌握影响试管苗生长发
育的环境因子,促进植株光合作用,使试管苗由兼养型转变为自养型,进而生产优质种苗的一种的植物微生殖技术。
8、原球茎:原球茎是兰花种子发芽过程中的一种形态学构造。种子萌发初期不消灭胚根,只是胚渐渐膨大,以后种皮的一端裂开、肿胀的胚呈小圆锥状,称为原球茎
9、植物工厂:是植物栽培的最高境地,是植物生长发育的最正确环境,它集成了全自动全智能的环境模拟技术为植物的生长与发
育制造出最正确的人工环境,是完全可控可调的依据人的意志进展治理的栽培系统
10、愈伤组织:是指在培育或自然条件下,植物细胞脱分化,不断增殖所产生的主要由薄壁细胞构成的不定形的组织。
11、组织培育试验室必要的设备:
1、根本设备:电炉、冰箱、酸度计、天平、纯水器、搅拌器
2、灭菌设备:蒸汽灭菌压力锅、过滤灭菌装置、紫外线灭菌灯
3、无菌操作设备:超净工作台、无菌接种箱
4、培育设备:恒温振荡培育箱、光照培育箱、摇床
5、细胞学鉴定设备:光学争论显微镜、实体显微镜、倒置显微镜
12、外植体选择原则:1、再生力量强;2、遗传稳定性好;3、外植体来源丰富;4、外植体灭菌简洁
13、培育基成分:①水分;②无机盐类;③有机养分成分;④植物生长调整物质;⑤天热物质;⑥pH;⑦凝固剂等
14、温度是影响外植体生长和分化的重要条件,大多数状况下,由于一个培育室内培育着很多种植物,培育室内的温度一般被设定:25℃±2℃
15、活性炭作用:吸附培育基及培育物分泌物中的抑制物质
抑制外植体褐变
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防止玻璃苗的产生
促进培育物生长和分化促进生根
16、植物快繁技术过程中,依据器官形成方式的不同,植物器官的再生种类
依据器官形成方式的不同,将植物器官的再生分为五种类型,即短枝发生型、丛生芽发生型、不定芽发生型、胚状体发生型和原球茎发生型。
17、糖的作用
生命活动中必不行少的碳源和能源调整培育基渗透压
18、在固体培育时使用最便利、最好的凝固剂:琼脂
19、试管苗的年生长量〔Y〕打算因素:
Y=mXn
m-无菌母株苗数;X-每隔培育周期增殖的倍数;n-全年可增殖的周期数
20、培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径:茎尖培育脱毒
21、生长素/细胞分裂素比值的凹凸打算着外植体的发育方向比值低时促进根的生长,这时脱分化占主导地位;比值高促进芽的生长,这时分化占主导地位。
22、生物学脱毒生产无毒植株的方法
茎尖组织培育脱毒法
愈伤组织培育脱毒法
微体嫁接离体培育脱毒法
珠心组织培育脱毒法
23、培育基灭菌〔p20〕
1、高压蒸汽灭菌法
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2、过滤除菌法
24、植物细胞全能性提出、进展与完善的
1902年,haberlandt提出了植物细胞的全能性,即植物的体细胞在适当的条件下,具有不断分裂和生殖,发育成完整植株的力量。20世纪70年月,细胞全能型的概念被解释为:每一个细胞具有该植物的全部遗传信息,具有发育成完整植株的力量。
80年月,此概念又进一步被解释为:每一个植物细胞带有该植物的全部遗传信息,在适当的条件下可表达出该细胞的全部遗传信息,分化出植物有机体全部不同类型的细胞,形成不同类型的器官甚至胚状体,直至形成完整再生植株。
25、常用的脱病毒植株检测方法和特点
〔-〕直接测定法
〔二〕指示植物法
〔三〕血清鉴定方法
〔四〕核酸分祈法
〔五〕电镜鉴定法
26、通过组织培育获得微型薯的技术关键步骤
27、使用高压灭菌锅时留意事项:
1、使用高压锅前应添加足够的水
2、锅内气压太高会引起局部有机物质的分解
3、灭菌后在气压表归零之前不要翻开锅盖,以免发生危急和培育基外溅现象
4、橡胶等有机物品会因高温高压而变性;
5、高压灭菌锅内有一个自动排气的小孔,不要使其堵塞,否则会因气压上升而引起危急
28、在组培苗工厂化生产中,生产本钱及降低商业化生产本钱
生产本钱:①人工费用。
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②生产物资费用。
③设备折旧费用。
④水电费用。
⑤其他费用。降低措施:
针对试管苗生产所需的费用,应实行相应措施降低生产本钱,增加产品竞争力,提高试管苗经济效益。
提高劳动生产率
削减设备投资,延长使用寿命
降低消耗
降低污染,提高生殖率和成活率
简化培育基
29、植物快繁的程序
植物快繁的程序包括四个阶段:1、无菌〔或初代〕培育的建立;2、生殖体增殖;3、芽苗生根;4、小植株的移栽驯化
30、康乃馨试管苗开花条件
培育基:1/2MS大量和微量元素十
%+蔗糖3%%
培育条件:温度22~28℃、每天光照约10h、光照强度约1000lx的人工气候箱中培育。
2个月后可分化出相当数量的花芽,分化率约56%。3~4个月后白色花开放。
31、组织培育用的培育基配制
1、培育基母液的配制
为了削减工作量,减小误差,最便利的方法是预先配制好不同组分的培育基母液。
〔1〕配置原则:一样类型的试剂混合;
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易形成沉淀的药品分开;母液浓度要适宜;
用量要认真计算和核对;药品要准确称量
MS培育基母液的配制
MS培育基母液依据试剂特性通常配成五种母液,即大量元素母液〔10或20倍〕、微量元素母液〔100或1000倍〕、Fe盐〔100倍〕、Ca盐〔50倍〕、有机物〔100倍〕。
激素母液的配制
生长素类、赤霉素类及脱落酸等用95%乙醇溶解;细胞分裂素类用1NHCl或1NNaOH溶解。
常激素母液浓度生长素类为 ~,~.
培育基的配制的具体步骤:
1、取出母液并按挨次放好。将干净的各种玻璃器皿如量筒、容量瓶、移液管、移液枪和玻璃棒等放在指定位置;
2、取一只容量瓶,放入配制培育基总量的1/3左右纯水,将母液按挨次参加,不断搅拌;
3、参加植物生长调整剂后定容;
4、将定容的培育基倒入容器中,参加蔗糖和琼脂,并加热使其完全溶解;
5、调整pH;
6、将培育基分装倒培育器皿中,封好瓶口;
7、灭菌,用高压锅灭菌〔121℃,15~20min〕或过滤除菌;
8、灭菌后待高压锅温度下降到50℃以下时,便可以取出、冷却凝固后待用。
32、试管苗的生态环境〔要自己拓展〕
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高温且恒温高湿
弱光无菌
33、草莓组培脱毒的方法与病毒检测手段
脱毒的方法主要有:
剪取5cm左右的顶梢→剪去叶片→自来水冲洗→70%酒精浸3~5s→%升汞消毒2~10min→无菌水冲洗
3~5次→剥离茎尖外面的幼叶和鳞片→切取茎尖分生组织
→接种于诱导培育基MS+++→分化培育基MS+~→20d分化丛生芽→生根培养基1/2MS+~→生根→炼苗→移栽
茎尖培育和热处理相结合
〔1〕40℃处理16h,35℃处理8h;时间4~5周
〔2〕38℃恒温,湿度60~70%,处理12~50d
〔3〕35℃7d,38℃,湿度40~68%,光照强度4000~5000Lx,35d
花药培育法。
取单核期的花蕾→低温〔4~5℃〕处理24h→70%酒精浸3~5s→%升汞消毒10~15min→无菌水冲洗3~5次→剥离花冠,取下花药→接种→诱导愈伤组织培养基MS+++→20d愈伤组织→培养基MS++→50~60d植株
脱毒苗的检测
指示植物小叶嫁接鉴定法
电子显微镜鉴定法
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34、培育基的根本类型及其特点:
培育基形态不同:固体培育基、液体培育基培育过程不同:初代培育基、继代培育基
其作用不同:诱导培育基、增殖培育基、生根培育基养分水平不同:根本培育基、完全培育基
成分和浓度不同:含盐量较高的培育基、硝酸钾含量较高的培育基、中等无机盐含量的培育基、低无机盐含量的培育基
1、MS培育基:无机盐浓度高;
高含量的氮、钾,尤其是硝酸盐;含有肯定数量的铵盐;
养分丰富;
不需要添加更多的有机附加物;
2、White培育基:1943年由White为培育番茄根尖而设计;
1963年作了改进,提高MgSO4的浓度和增
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加硼元素;

无机盐浓度较低;使用广泛;
在生根培育、胚胎培育中有良好的效果;
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3、B5培育基:1968年由Gamborg等为培育大豆根细胞而设
计;
含有较低的铵盐;
较高的硝酸盐和盐酸硫胺素;
4、N6培育基:1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培育设计;
KNO3和(NH4)2SO4含量高,不含钼;
35、一般组织培育的操作程序
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36、胡萝卜体胚发生体系的建立程序及影响体胚发生的影响因素。
〔1〕愈伤组织的诱导和保存
外植体:无菌苗的下胚轴〔〕、消毒叶柄〔~〕、贮藏根〔〕。
诱导培育基:MS+2,4-~,蔗糖30g/L,琼脂8g/L。
培育条件:26℃、黑暗条件下培育4~8周,即可获得愈伤组织。
继代培育:一样成分的悬浮培育基上或固体培育基上。2〕体细胞胚的诱导
继代4次以上的愈伤组织,用不锈钢的32μm、63μm和
125μm的过滤筛过滤。将保存在32μm的细胞团在1000r/min下离心5次后,沉淀物用于体细胞胚诱导。
诱导培育基:MS,参加5mmol/L的Ca2+有利于胚胎发生。
每10~18d将上述悬浮培育物移入1/2MS固体培育基上使体细胞胚成苗
3〕体细胞胚发生的主要阶段
体细胞胚胎发生至少经受两个阶段,即需要生长素阶段和不需要生长素阶段
形成胚性细胞团〔0期〕生长素→细胞缓慢增殖〔1期〕无激素
→形成球形胚〔2期〕→经受心形胚、形胚→再生植株〔3期〕
37、影响体胚发生的主要因素
〔一〕外植体
基因型往往是体细胞胚胎发生的打算因素。一般来说,下
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胚轴、叶柄和贮藏根等都是较抱负的外植体。
〔二〕生长调整物质
生长素(2,4-D)和细胞分裂素在胚性愈伤组织和体细胞胚胎发生的诱导阶段起作用,而ABA是在体细胞胚胎发育成熟阶段起作用。
〔三〕养分条件
常见诱导培育基:B5、MS、SH或改进的MS。
复原型氮对胡萝卜体细胞胚的启动和成熟特别重要。除NH4+的形式外,复原性氮还有多种形式,如椰子汁、水解酪蛋白以及多种氨基酸等。
金属离子在胡萝卜体细胞胚胎发生的过程中也是一个重要的因子
〔四〕环境因子
①光:胡萝卜体细胞胚胎发生过程中,完全黑暗或连续光照都能产生更正常的成熟胚。高强度的白光、蓝光抑制胡萝卜悬浮细胞的体细胞胚的发生和生长,而红光或绿光条件细胞胚的产率最高。
②细胞密度:悬浮培育的细胞密度会影响体细胞胚发生的频率。高细胞密度〔105个/ml〕是单细胞形成胚性细胞团所必需的,而较低密度〔2×104个/ml〕对胚性细胞团发育成体细胞胚更有利。
③气体:生物反响器中培育的胡萝卜细胞,氧气浓度猛烈地影响着随后的体细胞胚胎发生。20%~40%的氧气浓度能大大提高形胚和子叶形胚的产生频率。当氧气浓度增加到7%时,心形胚产生的量就会增加,但浓度超过20%时无显著变化。
④发育的同步性:为了一次性获得大量的体细胞胚,必需使发酵罐里悬浮培育的体细胞胚胎处于一样的发育时期。通过不断的
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