实验八 鸡红细胞融合.ppt

实验八鸡红细胞融合实验
一、实验目的
1. 通过PEG介导的鸡血细胞融合实验, 理解体细胞融合原理
2. 掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术,并观察细胞融合过程。
二、实验原理
细胞融合(cell fusion)或细胞杂交(cell hybridization) 是指真核细胞通过介导和培养,两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。
目前, 诱导细胞融合的方法有三种:病毒(Okada, 1958)、聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG) (Pontecorvo, 1975)和电激(Zimermann, 1980)。
PEG能改变各类细胞的膜结构,使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散、进而使其结构发生重排,再加上膜脂双层的相互亲合以及彼此间表面张力的作用,引起两个细胞邻接位置的重排质膜在修复时相互合并在一起, 使两细胞的胞质沟通, 从而造成相互接触的细胞之间发生融合。
三、实验用品
1 器材:
离心机,水浴锅,普通光学显微镜;量筒,滴管,刻度离心管,等。
2 材料:新鲜鸡血
3 试剂
Alsever液,,,。加重蒸水至100mL 。
%生理盐水,
GKN液:氯化钠8g,,,,葡萄糖2g,,溶于1000mL重蒸水中。
Ringer溶液:,,(),溶于1000mL蒸馏水中。
Hanks液:(另溶解),,,,,,,D-,。按顺序依次逐一完全溶解,用时氯化钙和其余混合,共计100mL。
50%PEG混合液:称取适量PEG(4000)放人刻度离心管沸水浴中加热溶化,待冷却至50℃时,加入预热至50℃的等体积的GKN液,混匀。注意使用前配制,PGE有毒避免沾染皮肤。
四、实验步骤
将Alsever液与新鲜鸡血4:1混成悬液(抗凝效果最佳)
↓
取上述悬液按 1:4 加入生理盐水混匀
↓
1500r/min,离心5