CHO细胞大规培养.doc

CHO细胞大规培养
1
摘要
CHO细胞是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary,CHO),1957年美国科罗拉多大学Dr. Theodore T. Puck从一成年雌性仓鼠卵巢分离获得,为上皮贴壁型细胞。微载体细胞培养开始于19世纪60年代末期,最早使用离子交换凝胶(DEAE-Sephadex A50)作为载体,轻微搅动即可悬浮在培养基中。由于这种微载体带有电荷,利于细胞贴附于载体上进行生长繁殖。载体处于悬浮状态时,这样既可大大增加细胞附着面积,又使细胞能与培养基充分接触,进而有利于细胞的生长,因此能达到大量培养细胞的目的。后来根据细胞附着生长的特点,对微载体进行改良,使其电荷或其介质更利于细胞附着和生长。培养液中大量的微载体为细胞提供了极大的附着表面,1 g 微载体其比表面积可达6000 cm2,从而可实现细胞的高密度培养。首先将CHO细胞在无血清培养基(SAF-CHO-G-004)中进行无血清驯化。其次将CHO细胞(成功用无血清驯化后的细胞)%胰酶消化制成细胞悬液后,沿导流管加入含明胶微载体和SAF-CHO-G-004细胞培养基的WhcltonBioster瓶罐中连续培养生成一定量的种子细胞。最后将种子细胞进行大规模培养。运用半连续式培养来操作:在细胞增长和产物形成过程中,每间隔一段时间,从中取出部分培养物,再用新的培养液补足到原有体积,使反应器内的总体积不变。最后在细胞培养过程中进行细胞常数的检查和培养基内污染物的检测一些抗凋亡策略来增加细胞培养的效率。
[关键字]CHO细胞;明胶微载体;无血清培养;半连续式培养
- -
2
目录
摘要....................................................... 1
关键字:CHO细胞明胶微载体无血清培养半连续式培养.......... 1
绪论....................................................... 3
....................................... 3
...................................... 5
............................................ 7
.................................. 8
.................................. 9
................................... 12
................................. 12
(semi-continuous culture) 操作........... 12
........................................... 14
.............................. 14
................... 15
................... 16
5抗凋亡策略在细胞大规模培养中的应用....................... 16
营养物质抗凋亡........................................ 17
基因抗凋亡............................................ 17
化学方法抗凋亡........................................ 17
参考文献: ................................................ 18
- -
3
绪论

CHO细胞是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary,CHO),1957年美国科罗拉多大学Dr. Theodore T. Puck从一成年雌性仓鼠卵巢分离获得,为上皮贴壁型细胞,是目前生物工程上广泛使用的细胞系。工业生产上应用较多的是CHO-K1细胞,为转化细胞系,细胞染色体分布频率是2n=22,系亚二倍体细胞。保存CHO