waters高效液相色谱.doc

waters高效液相色谱
Waters高效液相色谱操作说明
一. 简介
本高效液相色谱实验包括:waters1525泵+waters2487双波长检测器+色谱柱+电脑(breeze图谱处理软件)+流动相
二. 操作流程

确定色谱实验方法,处理好流动相1,换好流动相,确定色谱柱选择无误

打开泵开关,听到两声“嘀”的响声之后,再打开波长检测器。检测器进入预热阶段(此时检测器面板进入5min倒计时)这期间打开电脑,进入英文windows操作系统2,待检测器自检完毕(整个自检过程约6~7min),打开电脑桌面的(Breeze软件)。待程序完全启动,整个开机过程结束。系统默认进入上次使用的方案。


方案主要用来储存你的各个实验方法,数据等内容,你可以把它理解为一个文件夹。

选择→单击→单击"next"→在"project name"中输入方案名称(如
abc),"comments"中可填注释,也可不填。→单击"finish"

打开创建的方案
在界面下→单击→在"project"中找到你创建的方案(如abc)→点击"OK",即进入到我们自己的方案中了

在新建的方案中,需要建立不同的试验方法。试验方法主要设定的包括洗脱方式,检测波长等参数。

单
击→单
击→单击
(Flow选项卡)→在programmed flow中设定你的洗脱方式()→单击
→单击(channel 1选项
卡)→在"wavelength"框内设定你的检测波长(如265nm,280nm,215nm等等)→(设定结束,保存):单击
(重要) →输入方法名称如(abc 1)→单击"save"3
在programmed flow中可看到。其中Isocratic为等度洗脱,Gradient为梯度洗脱。以下我们来分述。
(Isocratic):"pump mode"中选择"Isocratic"
表格中"Isocratic Flow A"为流动相A的流速,"Isocratic Flow B"为流动相B的流速,"Total Flow"为总流速。
例如:假设方法要求用乙腈做A相,用纯水做B相,乙腈占70%,水占30%,等度,则:
(Gradient):"pump mode"中选择"Gradient"
表格中第1行默认已有,单击下面空白行处添加新行。
"Time"为时间,即此行开始时间;"Flow"不作更改,保持1ml/min的总流速;
%A处填A相比例;%B处填B相比例;curve处为曲线型号,一般不变。
例如:假设用方法要求乙腈做A相,用纯水做B相,0—10min乙腈从100%到50%;10—30min乙腈从50%到40%;30—60min乙腈从40%到80%;则:
。

方法设定完毕,我们还要进行洗泵与平衡两项工作,让机器做好进样前的准备。

在更换流动相,