菟丝子研究 (2).doc

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------菟丝子的现代药理研究
菟丝子:菟丝子为旋花科植物菟丝子(CuscutachinensisLam1)《神农本草经》列为上品,为常用中药。具有补阳益阴,固精缩尿,安胎、明目止泻的功效。用于阳痿遗精,尿有余沥,遗尿尿频,腰膝酸软,目昏耳鸣,肾虚胎漏,胎动不安,脾肾虚泻,外治白癜风。菟丝子主产于山东、河北、山西、陕西、江苏、辽宁、吉林、黑龙江、内蒙等地。别名:豆寄生、无根草、黄丝。

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①菟丝子干燥种子呈扁球形或卵圆形,两侧常凹陷,,短径约1毫米。种皮红棕色或棕黄色,微粗糙。在扩大镜下观察:表面有细密的深色小点,一端有淡色圆点,其中央有线形种脐。质坚硬,不易破碎。气无,味微苦涩。以颗粒饱满、无尘土及杂质者佳。
②大菟丝子:性状与上种相似,但较大,长径约3毫米,短径约2~3毫米,在扩大镜下观察:表面有排列成不整齐的短线状斑纹。同属植物海滨菟丝子及大豆菟丝子的种子在少数地区亦作菟丝子入药。

①菟丝子主产辽宁、吉林、河北、河南、山东、山西、江苏等地
②大菟丝子主产陕西、贵州、云南、四川等地。

(1)取本品少量,加沸水浸泡后,表面有黏性;加热煮至种皮破裂时,可露出黄白色卷旋状的胚,形如吐丝。
(2)本品粉末黄褐色或深褐色。种皮表皮细胞断面观呈类方形或类长方形,侧壁增厚;表面观呈圆多角形,角隅处壁明显增厚。种皮栅状细胞成片,断面观2列,具光辉带;表面观呈多角形皱缩。胚乳细胞呈多角形或类圆形,胞腔内含糊粉粒。子叶细胞含糊粉粒及脂肪油滴。

甘,温

归肝、肾、脾经。

滋补肝肾,固精缩尿,安胎,明目,止泻。用于阳痿遗精,尿有余沥,遗尿尿频,腰膝酸软,目昏耳鸣,肾虚胎漏,胎动不安,脾肾虚泻;外治白癜风。[1]
、分离纯化和含量测定


水煎煮法是一种强化的浸渍提取方法,只是操作温度较高达到了溶媒点,是中药最早,最常用的制剂方法之一。缺点:煎煮法仅适用于有效成分能溶于水,且对加热不敏感的药材。

浸渍法属于静态提取方法,是在常温或在加热条件下浸泡药材,使其所含的有效成分被浸出的方法。广泛应用于酊剂、酒剂的生产,适于黏性药物,无纤维组织结构的药材,新鲜及易于膨胀的药材。价格低廉的芳香性药材的提取,如尤其适用于热敏感性中药物料。但不适于贵重药材,毒性药材及制备高浓度的制剂

渗漉法是将药材粉碎后装入特制的渗漉筒或渗漉罐中,从渗漉罐上方连续通入溶媒,使其渗过罐内药材积层,发生固液传质作用,从而浸出有效成分自罐体下部出口排出浸出液。所得浸出液称为“渗漉液”,适于提取热敏感性、易挥发性或剧毒类中药物料,适于提取有效成分含量较低或要求浸出液浓度较高的中药物料,但对于一些提取物为黏性的,不易流动的物料,不宜使用本法。

回流提取法是以乙醇等易挥发的有机溶剂为提取溶媒对浸出液加热蒸馏,其中挥发性溶剂馏出后又被冷凝,重新回到浸出器中继续参与浸提循环进行,直至有效成分浸提完全。但存在着损失大、周期长、工序多、提取效率低等缺点

微波辅助萃取法采用微波作为热源,通过分子在微波电磁场中的快速旋转和离子在微波场中的快速迁移从而相互摩擦而发热,能量直接作用于被加热物质,加热速度快,通常只需30min左右即可完成提取,且不会破坏任何物质的分子结构,是理想的中草药有效成分提取的方法。

索氏提取法和常规回流提取法虽然效果也较好,但是提取所需时间较长,通常需要3~4h,而且样品长时间受热容易破坏结构,和微波辅助萃取法相比,相对效率较低。

闪式提取法通过破碎刀具的快速破碎和剧烈搅拌,使整个体系处于高速动态体系中,实现快速渗透,达到高效、快速提取
。但由于受提取容器大小、破碎刀具臂长的影响,本试验所用HBE250型闪式提取器适合提取100~300g的样品,样品量较少时,操作过程中损失较多,故总黄酮含量较低。

超声提取技术是利用超声波产生的强烈空化效应、机械振动、高的加速度、乳化、扩散、击碎和搅拌作用,增大物质分子运动频率和速度,增加溶剂穿透力,从而加速有效成分进人溶剂,促进提取的进行。超声波提取法具有提取时间短、产率高、条件温和等优点。缺点:超声波能量分布不均匀(只有紧靠超声波源附近的一小部分液体有空穴作用发生);以及随时间变化超声波能量要衰减


彭金年等[2]分别采用常规回流提取法、索氏提取法、微波辅助萃取法及闪式提取法对中药菟丝子进行提取;以芦丁为对照品,采用紫外分光光度法测定提取物中总黄酮的含量;以总黄酮的含量为考察指标,优选出最佳提取方法。结果表明,4种提取方法中,索氏提取法总黄酮含量最高,微波辅助萃取法和常规回流提取法总黄酮含量较高,闪式提取法总黄酮含量最低;综合考虑,认为微波辅助萃取法具有高效、省时等优点,提取效果较好。

王刚[3]对比研究了冷浸提取、温浸提取、乙醇回流提取、超声波提取、渗漉提取5种方法对菟丝子总黄酮的提取效果,并利用正交试验对总黄酮的乙醇回流提取工艺进行了优化。结果乙醇提取效果最好,最佳提取工艺为10倍量95%乙醇回流1次,180min/次,%。结论优化提取工艺简单、稳定、可行。
:陈林林等[4]研究了大孔吸附树脂纯化菟丝子黄酮的方法。以菟丝子总黄酮含量考察纯化后黄酮纯度,对可能影响纯化的因素进行单因素试验,确定纯化的最佳工艺条件为:选用H-103型大孔吸附树脂,吸附液pH值为3~4,洗脱剂浓度60%,,吸附时间60min,洗脱剂量与树脂比为8。

阎超[5]采用高效液相色谱法(HPLC)对和田菟丝子中槲皮素和山萘酚进行了定量测定。·g-1,·g-1;·g-1,·g-1。和田菟丝子寄主不同,其槲皮素和山萘酚的含量不同,应结合寄主植物研究其有效成分

菟丝子的化学成分主要包括香豆精、黄酮、甾醇类、多糖、淀粉、蛋白质、胡萝卜素类、蒲公英黄质、有机酸、脂肪酸、氨基酸、淀粉酶等成分。

郭澄等[6]首次从南方菟丝子中分离鉴定了紫云英苷、山萘酚、槲皮素。郭宏祝等[8]研究发现南方菟丝子中所含的黄酮主要为槲皮素及其糖苷。金晓等[7]从菟丝子中分离到槲皮素、紫云英苷、金丝桃苷,槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-葡萄糖。叶敏等[8]又分离鉴定了山萘酚、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-(2→1)-β-D-芹糖苷、异鼠李素、d-芝麻素、9(R)-羟基-d-芝麻素。

从3种菟丝子分离鉴定了β-谷甾醇、β-谷甾醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷、豆甾醇、△5-燕麦甾醇、菜油甾醇、胆固醇、豆甾-5-烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷四乙酸、豆甾-5-烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、豆甾-5-稀基-3-乙酸、胡萝卜苷、β-谷甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷[6,9,10]。

从南方菟丝子中分离鉴定了二萜糖苷类化合物南方菟丝子苷A(australisideA)[11]。

候冬岩等[12]从金灯藤分离鉴定的挥发油成分包括:3-乙基-2-己烯、3-乙烯-2-酮、2,3,3-三甲基-1-丁烯、E-2-己烯-1-醇、2-庚酮、2-环己烯-1-酮、2-戊基呋喃、葵烷、十一烷、十二烷、2,6-二甲基十一烷、十三烷。而菟丝子中相同的成分只有2-戊基呋喃和十二烷,其他的成分尚有3-丁烯-2-醇、糠醛、2-呋喃甲醇、庚醛、3,7-二甲基-1,6-辛二烯-3-醇、冰片、α-萜品醇,石竹烯、α-石竹烯。

从菟丝子分离鉴定了色氨酸衍生物生物碱菟丝子胺、matrine、sophoranol、甲基金雀花碱、7’-(3’4’-二羟基苯)-N-(4-丙烯胺)、7’-(4’-羟基-3’-甲氧基苯)-N-[(4-丁基苯)乙基]丙烯胺[13,14]。

从菟丝子中分离到菟丝子苷A、B(cuscu-tosideA,B)、新菟丝子苷A,B,C(neocuscutossideA,B,C)[15,16]。

从菟丝子中分离出酸性多分支的杂多糖CHC-1,H3,CS-A,CS-B,CS-C[17,18]。



王建红等[19]探讨了菟丝子调节卵巢内分泌功能的作用机理。发现菟丝子黄酮下调心理应激大鼠下丘脑神经递质β-EP,上调腺垂体LH水平,可能是菟丝子黄酮调节下丘脑-垂体-卵巢轴功能的机理之一。
王晓敏等[20]研究表明菟丝子黄酮高剂量和低剂量组能提高主动脉平滑肌细胞的雌激素受体阳性表达。本实验结果提示补肾中药菟丝子的有效部位2菟丝子黄酮对血管的保护作用是通过调整血脂代谢和增加血管壁上的雌激素受体数目等多靶点,多途径来实现的

郭澄等[21]报道3种商品菟丝子对小鼠CCl4肝损伤的保护作用,发现以药典收录的菟丝子较另两种的活性更强。半乳糖可致大鼠晶状体浑浊,灌胃菟丝子提取液能减轻浑浊程度,表明菟丝子对大鼠半乳糖性白内障具有延缓和治疗作用。此作用与纠正相关酶活性有关,并能抑制晶状体中的脂类过氧化。经研究作者认为黄酮类化合物能够抑制糖性白内障的关键酶2醛糖还原酶的活性,是菟丝子中重要的活性成分[22~24]

菟丝子黄酮可减轻实验性心肌缺血的程度和范围,并有效改善心脏血流动力学、增加冠脉血流量、减少冠脉阻力,而使缺血心肌供血量增加;同时降低心肌耗氧,而使心肌能量消耗下降。这种既“增产”又“节约”的综合效应,对实验性心肌缺血具有明显的预防和治疗作用[25]。
、抗凋亡作用
吴春等[26]采用DPPH体系、羟基自由基体系、烷基自由基引发的亚油酸氧化体系、超氧阴离子自由基体系对菟丝子黄酮的抗氧化活性进行研究,并同Vc、BHT进行了比较,%、%%;%,且其抗氧化活性强于Vc和BHT,说明菟丝子黄酮是一种天然有效的自由基清除剂。将菟丝子黄酮制成脂溶性微胶囊后,考察了其在油脂中的抗氧化活性。结果表明微胶囊菟丝子黄酮能明显延长油脂过氧化的诱导期,VC、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、EDTA等对其抗氧化作用均具有协同增效作用,与合成抗氧化剂混合使用时,其抗氧化能力均好于只添加单一抗氧化剂的效果[27]
王晟等[28]通过测定丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、活性氧(ROS)等氧化损伤指标,原位末端标记法检测睾丸细胞凋亡,发现不同剂量的菟丝子总黄酮可抑制无血清培养所诱导的大鼠睾丸细胞氧化损伤和凋亡,且其作用具有剂量依赖性,说明菟丝子总黄酮是一种有效的抗氧化剂,具有抗氧化、抗凋亡的作用。

谢雁鸣等[29]通过UMA2106201成骨细胞株进行成骨细胞培养,观察ALP活性和3H-TdR掺入的情况,结果发现菟丝子总黄酮ALP活性高于对照组(P<),显示菟丝子总黄酮对成骨细胞活性的促进作用。王晓敏等[30]通过实验证明,菟丝子黄酮能上调去势雌性大鼠血清雌激素水平(P<),提高其主动脉平滑肌细胞早期凋亡率(P<)。郭澄等[31]利用酶联检测仪检测其对ICR小鼠腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子(TNF)的影响,结果发现菟丝子黄酮对TNF有明显的抑制作用,可显著降低小鼠的TNF水平,提示菟丝子可能具有抗癌症恶病质的作用。柯江维等[32]研究发现菟丝子黄酮能促进下丘脑-垂体促性腺功能,提高垂体对促性腺释放激素的反应性,促进卵泡发育,对血浆LH水平虽无明显影响,但能增强卵巢HCG/H受体数目与功能,可明显增加幼年雄鼠睾丸及附睾质量。真国辉等[33]采用MTT法检测细胞活力,发现不同剂量菟丝子黄酮预处理可提高PC12细胞存活率,明显抑制细胞的凋亡,降低细胞的凋亡比率,对DPPH自由基的清除率呈剂量依赖性增强。余白蓉等[34]研究发现菟丝子黄酮能明显促进大鼠腺垂体、睾丸及附睾的发育,能明显促进离体大鼠间质细胞睾酮的基础分泌,还能提高间质细胞对hCG的反应性,增加睾丸对hCG的结舍力。王晟等[35]还通过离体培养小鼠睾丸组织细胞凋亡的实验,研究发现菟丝子总黄酮可抑制无血清培养诱导的睾丸细胞凋亡,降低丙二醛含量。


通过观察菟丝子对体外传代培养人无色素黑素瘤细胞YUGEN8组细胞内酪氨酸酶的表达、成熟及内质网输出过程与阴性对照组的差异,发现菟丝子对黑素瘤细胞内酪氨酸酶的成熟、稳定及内质网输出具有一定促进作用[36]。菟丝子具有促进成骨细胞增殖及分化成熟,降低破骨细胞生存率、诱导其凋亡的作用,血清药理学实验提示含药血清同样具有促进成骨细胞增殖和分化的作用[37]。李志刚等[38]用四唑盐(MTT)方法检测细胞活力,用Hoechst33258染色法观察细胞形态变化,用流式细胞技术检测细胞凋亡比例,发现菟丝子提取物对MPP+诱导的PC12细胞凋亡有明显的保护作用。沈骅睿等[39]采用菟丝子醇提物刺激成骨细胞的分化,用RT-PCR检测和倒置显微镜下观察菟丝子水提物对成骨细胞刺激后的变化,结果发现RT-PCR检测有神经元细胞和神经胶质细胞的特异性蛋白神经元烯醇酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达,在倒置显微镜下观察到神经元样细胞生长,显示在体外,菟丝子醇提物具有诱导大鼠成骨细胞向神经元细胞定向分化的作用。王利华等[40]以常用的神经嗜铬细胞瘤PC12细胞株为实验模型,通过比较活性氧(ROS)作用细胞后的细胞活力、凋亡相关蛋白(p53、Bax)水平以及细胞中SOD、GSH、MDA的差异,发现菟丝子提取物不仅能提高ROS损伤的已分化PC12细胞活力,调节细胞中凋亡相关基因的表达,而且还能提高细胞中SOD和GSH的含量,降低MDA水平。由此表明,菟丝子提取物对ROS造成的PC12细胞损伤有一定的保护作用。张庆平等[41]将昆明种小鼠50只分为5组(阴性和阳性及低、中、高剂量组),给药8d后测定各组动物脏器系数、腹腔巨噬细胞吞噬功能、脾淋巴细胞增殖反应、白介素活性,结果发现菟丝子可促进小鼠免疫器官脾脏、胸腺增长(P<),并提高巨噬细胞吞噬功能(P<),促进淋巴细胞增殖反应(P<),诱导白介素产生,说明菟丝子具有增强小鼠机体免疫功能和免疫调节作用。顾立刚等[42]将一定浓度的菟丝子中金丝桃苷经体内和体外作用一定时间后,分别测定小鼠脾T、B淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的功能变化,发现一定浓度的菟丝子中金丝桃苷在体内外具有增强免疫功能的作用。

蔡曦光等[43]通过试药组衰老小鼠,分别灌胃给菟丝子多糖,7周后分别测定心、肝、肾中MDA,SOD,GSH2PX和脑中LF
,胸腺指数和脾脏指数,结果发现受试组小鼠分别灌服不同剂量的菟丝子多糖能使心、肝、肾组织中MDA含量和脑中LF不同程度下降,SOD及GSH2PX活力不同程度提高,胸腺指数和脾脏指数不同程度升高,显示菟丝子多糖有显著抗衰老作用。王昭等[44]采用D一半乳糖所致衰老模型小鼠,灌服菟丝子水煎剂30d后测定红细胞C3b受体花环率(RBC2C3bRR)及免疫复合物花环率(RBC2ICR);结果发现菟丝子水煎剂能提高小鼠RBC2C3bRR(P<),使小鼠RBC2ICR降低(P<),说明菟丝子明显增强衰老模型小鼠的红细胞免疫功能,具有延缓衰老作用。刘玉平等[45]及蔡曦光等[46]将大鼠随机分为青年对照组、衰老模型组和模型给药组,用D-半乳糖制造衰老模型,同时模型给药组灌服菟丝子醇提液并在不同时间杀鼠,测定糖化血红蛋白(GHb)、糖化血清蛋白(GSP)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,发现菟丝子醇提液使大鼠GHb、GSP、MDA水平明显减低(P<,P<),SOD活性显著升高(P<0101),说明菟丝子抑制非酶糖基化反应,减少自由基生成,具有一定的抗衰老作用。

颜志中等[47]采用Pereoll梯度离心法选择具有正常生理功能的精子作为正常精子模型,应用次黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶(HX-XO)体系产生活性氧(ROS),在有氧环境下,ROS、不同含量的菟丝子与精子共同孵育后,计算精子顶体完整率,透射电镜观察精子预体和超微结构,并与已知的抗氧化剂VitC对照,结果发现适宜含量()的菟丝子通过其有效的抗氧化作用,拮抗ROS的氧化作用,对ROS造成的精子膜、顶体结构和精子线粒体功能过氧化损伤具有明显的干预作用。杨欣等[48]应用与上类似的方法研究发现适宜含量的菟丝子水提物对ROS造成的精子膜、顶体结构和精子线粒体功能损伤具有明显的保护作用。

杜建海等[49]研究发现,菟丝子水提取物可促进脂肪组织释放游离脂肪酸,并存在剂量效应关系。心得安、异搏定和无钙液可不同程度的阻断菟丝子的兴奋作用,说明菟丝子水提物可通过增加FFA的释放,促进离体脂肪组织的分解代谢,其作用可能部分经肾上腺素能β受体、异搏定敏感的L型Ca2+内流介导。余辉艳等[50]分别经口给大鼠予生理盐水和菟丝子水煎液2周,差速离心分离肝微粒体,HPLC法分别测定大鼠肝微粒体中CYP1A2、2D6以3A4探针药物的代谢率;通过Westernblot测定大鼠肝微粒体中CYP1A2,2D6以及3A4蛋白的相对含量,研究发现菟丝子水煎液可诱导大鼠肝微粒体中的CYP2D6和CYP1A2,而对CYP3A4无影响。

王建红等[51]通过心理应激刺激方法研究发现菟丝子能调节卵巢内分泌功能。其作用机理:菟丝子黄酮下调心理应激大鼠下丘脑神经递质β-EP,上调腺垂体LH水平;可能是菟丝子黄酮调节下丘脑-垂体-卵巢轴功能的机理之一。

菟丝子的酱油(菟丝子和豆饼酿成)浸剂、酊剂能增强离体蟾蜍心脏的收缩力,前者使心率增加,后二者使心率降低,对麻醉犬使其血压下降[52]。刘忠荣等[53]观察了菟丝子不同提取工艺对实验犬血流动力学药效学的影响(给药组剂量为20mg/kg静脉注射),结果表明,三个不同提取工艺样品均能增加心肌冠脉血流量,但3个样品对心肌耗氧量具有不同的影响,其中3号制剂心肌耗氧量降低;而1、2号制剂则增加心肌耗氧量。

刘建辉等[54]研究发现菟丝子提取物在诱导PC12细胞分化的同时,可明显提高有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)磷酸化,表明该提取物诱导PC12细胞分化可能与MAPK途径有关。同时还发现该提取物能一定程度地抑制去血清引起的细胞凋亡,表明它具有一定的神经营养作用。

嵇志红等[55]将健康成年雄性SD大鼠随机分成4组,除对照组外,其余各组大鼠用双侧颈总动脉反复夹闭再灌注配合腹腔注射硝普钠降压方法建立脑缺血大鼠动物模型,Y迷宫及跳台实验检测大鼠的学忆能力,生化测定脑组织SOD活力及MDA含量,结果发现菟丝子水提物可显著改善脑缺血所致大鼠记忆障碍,其作用机制可能与菟丝子的抗氧化作用有关。

林慧彬等[56]通过动物实验研究发现菟丝子藤茎有一定的抗疲劳及耐缺氧作用。

,按30~40g/kg灌胃并不出现中毒症状;、浸剂、酊剂给大白鼠灌胃,连续70d,不影响动物的生长发育,亦未见病理改变[52]