家兔急性肾功能不全及其肾功能评价指标检测.doc

家兔急性肾功能不全及其肾功能评价指标检测
姓名温正煌学号2012**********专业临床医学班级本部4班
实验目的
。
,从而探讨致病因素及急性肾功能不全的可能
发病机制。
实验材料和方法
实验仪器:分光光度计,离心机,恒温水浴锅,哺乳动物手术器械,注射器,试管架,试管,
试管夹,微量移液器,量筒
实验药品和试剂:20%氨基甲酰乙酯,%酚红溶液,20%葡萄糖溶液,10%NaOH,%NaOH 溶
液,50%乙酸溶液,1%氯化汞,碱性你苦味酸,生理盐水,肌酐标准应用
液,蒸馏水
实验动物家兔
实验步骤
:于实验前24h,取两只家兔,称重,一只作为实验兔,按 ~
10g/L氯化汞造成急性肾功能不全备用,另一只皮下注射或肌肉注射等量的生理盐水作为对照兔。
:用200g/L氨基甲酸乙酯按5ml/kg体重剂量注射耳缘静脉,缓慢注射。待兔麻醉后将其仰卧,先后固定四肢及兔头。
:剪去家兔胸前区部位的毛,在第3~4肋间靠近胸骨处,用左手食指摸到心跳最明显处,右手持注射器垂直刺入心脏,当针穿刺心脏时,血液由于心脏搏动的力量自动进入注射器,取血3ml,推入干燥试管,静置。
膀胱插管术:从耻骨联合向上沿中线作约3~4厘米的切口,沿腹白线打开腹腔,将膀胱轻拉至腹壁外,先辨认清膀胱和输尿管的解剖部位,先用注射器取尿液2ml于试管中,然后在输尿管下方穿线结扎尿道,再用止血钳提起膀胱前壁(靠近顶端部分),选择血管较少处,切一纵行小口,插入插管后结扎,将膀胱插管平放于耻骨处,引流管自然下垂,管口低于膀胱水平,排空膀胱,术毕,用温热生理盐水纱布覆盖腹部切口。然后准备小烧杯,收集尿液。
:按1ml/%酚红溶液,开始计时,再按30ml/kg耳缘静脉缓慢注射20%葡萄糖溶液。从注射酚红溶液起收集15分钟(对照组),30分钟(模型组)尿液。


,加入10%NaOH10ml,使之显色,再加入自来水至500ml摇匀。
,与标准管比色管进行比较,即为15min、30min酚红排泄率。

将静置后心脏采血的血用离心机2000r/min离心5分钟,小心吸取血清置于另一干燥试
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管中,测血肌酐用。取硬质试管3支编号,分别为空白管、标准管及测定管。按表1加样,混匀,37℃水浴30min,用分光光度计以波长510nm,空白调零,读OD值。然后各管液体倒回试管,加50%乙酸溶液两滴,静置6min后,再测OD’值。按公式Cr(mg%)=(OD测-OD’测)/(OD标-OD’标)××100(正常值=~%)
表1 血清肌酐测定
单位/ml
肌酐标准应用液/() 血清蒸馏水碱性苦味酸
空白管
标准管
测定管