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淀粉酶及其同工酶

血清淀粉酶同工酶分成S(唾液型)型和P(胰型)。

除了胰腺、腮腺疾病外还有一些疾病如胆囊炎、小肠梗阻、消化道溃疡穿孔、异位妊娠、恶性肿瘤等也可出现血清淀粉酶活性增高,可能的原因之一就是这些患病组织含有淀粉酶,在炎症时通过各种途径入血引起血清淀粉酶活性增高。但至今国内外对于各种人体组织淀粉酶含量的研究报告甚少。我们收集了部分正常人体组织,经匀浆后测出匀浆上清液中的总淀粉酶(Amy)活性,并用抑制法测定唾液型和胰型淀粉酶同工酶(S-Amy和P-Amy),从而为探讨临床上血清淀粉酶增高机制提供了实验依据。
1 材料
仪器 Beckman Clinical System 700型生化分析仪。高速台式离心机,KD-300
组织匀浆器。
试剂淀粉酶活性测定采用上海长征公司淀粉酶试剂盒(PNPG4法)。淀粉酶抑制
物,为小麦唾液淀粉酶抑制蛋白,由上海长征医院临床酶学研究室纯化和提供[1]。
材料和样品采集意外死亡的正常人3名,2名男性分别为25
岁、28岁,1名女性55岁,于死亡后6 h内采集样品,取胰腺、腮腺、胃、空肠、回肠、输卵管、子宫、肺、
胆囊、骨骼肌和睾丸组织,各取20 g左右。
2 方法
组织匀浆液的制备每种组织重复取样6次,每次取500 mg,先用生理盐水清洗,加入pH mol/L Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液2 ml后置组织匀浆器中进行匀浆。匀浆
器转速为15 000 r/min,时间为30 s×4次。将匀浆液3 000 r/min离心10 min。离心完毕后,吸取上清液进行总淀粉酶和淀粉酶同工酶测定。此步可使95%以上的细胞破碎并释放
出淀粉酶[2]。
测定参数温度37°C,波长405 nm,延迟时间60 s,测定时间120 s,因数
7000。
淀粉酶总活性测定 50 μl生理盐水加10 μl匀浆上清液加500 μl底物液,按上述测定参数测定,如果总淀粉酶活性>1 000 U/L,则用生理盐水稀释后再进行测定。
胰淀粉酶活性(P-Amy) 50 μl抑制剂加10 μl匀浆上清液,37°C温育10 min,再加入500 μl底物液,按上述参数测定,得剩余Amy活性(R-Amy)。结果计算及校正:总Amy(U/L)=7000×ΔA/min。R-Amy(U/L)=7000×抑制后ΔA/min(U/L)。由于该抑制剂对S-%,对P-Amy的交叉抑制率为20%,故P-Amy(U/L)=-Amy-

×总Amy。S-Amy(U/L)=总Amy-P-Amy。
3 结果与讨论
结果见表1与表2。
表2 人组织相对于血清中淀粉酶的活性倍数
本文测定的11种脏器中,以腮腺、胰腺单位重量内所含淀粉酶活性最高,均达正常人血清中含量107倍以上。曾有人认为血清中淀粉酶几乎来源于这两种脏器,但实际上胃、胆囊、输卵管、子宫、脾、空肠、回肠的淀粉酶含量虽较胰腺、腮腺内的含量少10 000倍,但仍达正常人血清淀粉酶含量的1 000倍。因此,当这些脏器炎症、损伤时也会引起血清淀粉酶增高,但