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现代分子制药工程
经典的基因治疗:指正常的基因整合入细胞基因组以校正或置换致病基因的一种治疗方法。广义的基因治疗:将某种遗传物质转移到患者细胞内,使其在体内发挥作用,以达到治疗疾病目的的方法。
基因治疗分类;体细胞(somatic cell)基因、治疗生殖细胞(germline)基因治疗
基因治疗步骤:
ADA基因+逆转录病毒载体
导入患者淋巴细胞
体外扩增
回输病人体内
淋巴细胞ADA酶恢复至正常水平的5%-10%
维持免疫系统功能,改善病人症状
基因治疗的必要条件
发病机制在DNA水平上已经清楚;
要转移的基因已经克隆分离,其表达产物有详尽的了解;
该基因正常表达的组织可在体外进行遗传操作;
一、基因治疗的策略
(四)自杀基因治疗(三)基因干预(二) 基因添加(一)基因置换
基因治疗途径:1、间接体内治疗途径2、直接体内治疗途径
基因转移技术: 。 。逆转录病毒整合入宿主DNA中的分子机制,其本质是转座
逆转录病毒载体的主要缺点
随机整合,有插入突变、激活癌基因的潜在危险;
逆转录病毒载体的容量较小,只能容纳7 kb以下的外源基因。
基因干预的种类
(antisense RNA)
(RNA interference)
(ribozyme)
延长半衰期常用方法
聚乙二醇化
白蛋白融合
可溶性受体融合
糖链化
生物技术药物
重组蛋白多肽类
单克隆抗体及其片断
寡核苷酸
疫苗制剂
基因治疗药物(核酸制剂)
干细胞药物
蛋白肽类药物药代动力学
吸收
分布
代谢与排泄
蛋白肽类药物特点及其应用
明显的种族特异性:实验动物的选择;
免疫原性:ELISA; 反复给药产生抗被测试药物的抗体;
体内有大量的蛋白肽类物质包括结合蛋白:生物样品的前处理:LC-MS;
被测试药物尤其细胞因子给药量极小(ng-pg/ml): 检测灵敏度;
存在被测试药物的内源性物质:本底效应;同位素法; suppression via physiological regulation or feedback, eg, infusing glucose to suppress endogenous insulin
生物活性不仅取决于药物的一级结构,而且与其二级、三级结构有关:生物检定法;生物PD-PK模型
蛋白肽类药物样品检测方法
免疫测定法
酶联免疫吸附测定法
放射免疫测定法
免疫放射定量法
同位素标记示踪法
生物检定法
高效液相、液质联用法、毛细血管电泳(CE)、高效毛细血管电泳
(HPCE) 和毛细血管电泳色普(CEC);
ELISA法
优点
高度的灵敏度: ng-pg/ml;
较高的特异性;
易于操作、快速、不使用同位素、无辐射源,适用于批处理;
试剂使用寿命长;
目前最常用的检测方法。
缺点
待测蛋白多肽的免疫活性而非生物活性;
不能区别具有抗原决定族的代谢物片断;
不能同时测定代谢物片断;
不同来源抗体结合性不一;