羟脯氨酸的测定方法
1羟脯氨酸含量测定
2羟脯氨酸标准曲线绘制
3试剂的配制【6-7】
[6] 李秋营,,32(6):558-559
[7] David J Etherington, Trevor J Sims. Detection and Estimation of Collagen[J]. J Sci Food Agric, 1981,32:539-546
柠檬酸缓冲液:柠檬酸钠120g、冰醋酸12mL、柠檬酸46g、氢氧化钠34g 溶解于蒸馏水中,调整pH ,然后定容至1000mL。
氯胺T 溶液:称取氯胺T ,溶解于100mL 蒸馏水中,然后加入乙二醇独甲醚150mL,再加入250mL 柠檬酸缓冲液混合均匀。
对二甲基氨基苯甲醛: 试剂 A:取无水乙醇20mL,;试剂B:,慢慢加入无水乙醇40mL,水浴加热使其完全溶解并冷却至室温,然后将A 液慢慢加入B,混合均匀。
高氯酸溶液:取27mL 高氯酸,以蒸馏水定容到100mL。
羟脯氨酸标准曲线的绘制羟脯氨酸标准储存液:准确称取L-羟基脯氨酸标准品50mg,加入 盐酸中溶解,稀释并定容到100mL,在冰箱中保存。
羟脯氨酸标准工作液:吸取羟脯氨酸标准储存液10mL到50mL 容量瓶中,用蒸馏水定容到50mL(临用前配),浓度为100μg/mL。
4标准曲线绘制
、、、、、、,用蒸馏水定容到50mL容量瓶中。以蒸馏水为空白,分别吸取上述标准液1mL,加入1mL 柠檬酸缓冲液和1mL 氯胺T 溶液,室温(25 ℃) 氧化10min 后, 加入高氯酸1mL(),放置10min,加入对二甲基氨基苯甲醛试剂1mL,在65℃水浴显色10min,冷却后在560nm处测吸光度。以羟脯氨酸浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线,求出回归方程。浓度μg/mL
吸光度A560
羟脯氨酸的测定方法 来自淘豆网m.daumloan.com转载请标明出处.
