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超级杂交液特点及使用方法
华越洋超级杂交液
Super-hyb solution
华越洋超级杂交液特点:
核酸杂交一般是指用一种标记的核酸探针与印迹膜上的核酸进行杂交,由此检测印迹膜上是否存在与探针同源的核酸分子(靶分子)。核酸杂交是分子生物学的基本技术之一,应用非常广泛。由于核酸杂交效率受印迹膜种类、杂交温度、探针浓度、杂交液离子强度、杂交液pH及杂交液粘度等因素影响,用户自己摸索和优化相关条件非常繁琐,因此华越洋生物开发了本产品,它具有下列特点:
1. 既可用于Southern杂交(靶分子为DNA),也可用于和Northern杂交(靶分子为
RNA),还可以用于菌落杂交,基因芯片等杂交。
2. 既可以用于同位素探针的杂交,也可以用于非同位素探针的杂交。
3. 既可以使用DNA(包括DNA Oligo)探针,也可以使用RNA探针(包括RNA Oligo)
4. 含多种能够促进杂交的聚合物,使杂交反应能在6~12小时完成,而常规杂交反应一般
需要12~24 小时。
5. 含多种封堵剂,能阻印迹膜对探针分子的非特异性吸附,能有效降低背景信号,延长曝
光时间以便检测到低拷贝的RNA(Northern)和单拷贝的基因(Southern)。
6. A型不含甲酰胺,B型含50%的甲酰胺。后者使杂交在较低温度就可以完成,适合Tm
较高的分子杂交(如RNA-RNA和RNA-DNA杂交)。
跟各种常用的印迹膜兼容,包括硝酸纤维素膜和尼龙膜。
运输及保存:
华越洋生物超级杂交液:低温运输,-20℃保存,有效期一年。本产品属于高盐溶液,低温下产生沉淀,必须在65℃加热溶解并充分摇匀后才能使用。
使用方法:
一、根据探针和靶分子的不同,分别按下面不同情况计算杂交分子的Tm 值
1. 对DNA-DNA杂交,其Tm = + ×log10[Na+] + ×GC%–500/L 说明:L是探针或靶分子的长度(用两者中最短的一个)
GC%是探针或靶分子中的GC百分比(用两者中最短的一个)
Na+浓度是本产品中Na+ 的浓度, M,×log10[Na+]=(-)
2. 对DNA-RNA杂交,其Tm值比DNA-DNA的Tm值要高10-15℃。
3. 对RNA-RNA杂交,其Tm值比DNA-DNA的Tm值要高20-25℃。
4. 对Oligo探针杂交,Tm=GC数量×4℃+AT数量×2℃。
二、确定最佳杂交温度(预杂交温度跟杂交温度应该一样)
1. 对于大于200bp的DNA-DNA杂交,最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃,一般
选择68℃。
2. 对RNA-RNA或DNA-RNA杂交,最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃。如果这
样计算出的杂交温度很高(如高于70℃),则RNA容易降解,所以最好选用含甲酰胺的超级杂交液(B型本产品),以便能在42℃完成杂交。
3. 对Oligo探针的杂交,最佳杂交温度一般比Tm低5℃。由于Oligo较短,更容易
受各种因素影响(如错配率、修饰碱基比例等),所以最佳温度需要适度摸索和优化。
三、确定洗膜温度
×SSC做洗膜液,在此条件下的最佳洗膜温度比Tm