酶工程实验报告六(纤维素酶的固定化及其性质测定).doc

touhun
本科学生实验报告仅供参考责任自负
学号 104120440 姓名孙永升
学院生命科学学院专业、班级 10生物技术
实验课程名称酶工程< 实验>
教师及职称李俊俊< 讲师>
开课学期 2012 至 2013 学年第二学期
填报时间 2013 年 5 月 29 日
云南师范大学教务处编印
实验名称
实验方式
小组成员
实验六纤维素酶的固定化及其性质测定
小组合作
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实验目的
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学会固定化酶酶学特性的测定方法。
实验仪器、试剂和溶液:
仪器:
紫外分光光度计、比色皿(3个)、恒温水浴锅、试管架(1个)、l移液管、洗耳球、、注射器、标签(若干)等。
2 .2 试剂和溶液
2 . 柠檬酸钙缓冲液,,;
2 . 10mg/ml的CMC-Na溶液(底物溶液);
2 . DNS试剂(CMCA-DNS);
2 . 稀释到200倍的纤维素酶液;
2 . %、%、%、 %的海藻酸钙溶液;
2 . 2%的CaCl2溶液。
3、实验原理或装置示意图:
酶的固定化
把游离的水溶性酶限制在某一局部空间或固体载体上,酶固定后既不会流失,也不会污染产品,而且稳定性得到提高可长期反复使用。
最常用的固定化方法是包埋法。
海藻酸钙包埋法:通常是在其钙盐溶液中加入二价离子(如Ca2+),通过Ca2+取代Na+
来形成凝胶网络。
4、实验方法步骤、操作流程及注意事项:
4 .1 实验方法:
(一)酶液的准备
(二)纤维素酶的固定化
(三)固定化纤维素酶性质的测定
4 .2 实验操作步骤:
1、将预先准备好的200倍纤维素酶液酶准确稀释:固定化酶稀释到1000倍,测游离酶稀释到10000倍待用。
2、纤维素酶的固定化:各取四瓶200mlCaCl2溶液于500ml三角瓶中待用。各取30ml不同浓度(%、%、%、%)的海藻酸钙于50ml小烧杯中,并分别取取稀释到1000倍的纤维素酶液10ml加入不同浓度的海藻酸钙溶液中,混合均匀。
3、用注射器将上述混合液取20ml(各取四次)逐渐滴入200mlCaCl2溶液的三角瓶中
静止冷却20min后,经固定化的小球纱布过滤晾干待用。
4、,,60℃预热10min。
5、准确计时后,于保温后的酶液中依次加如CMC-,在50℃水浴中继续保温30min(准确计时)。
(固定化酶对照中不加入底物、游离酶对照中先不加入酶液)
6、反应混合物物保温 30min后,于各个浓度底物试管中加入3mLDNS试剂终止液,迅速振荡均匀。
(1) ml 的酶液。
(2)-Na溶液。
7、混合后将各个实验组的三支试管沸水浴5min,自来水冷却后,。摇匀,在540nm处读取OD值。
8、固定化酶与游离酶稳定性比较(操作按上面所述):将得到的固定化纤维素酶(海藻酸钙浓度为