HPLC常见问题和对策.doc

HPLC常见问题和对策
HPLC色谱常见问题
,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?
?

,柱压不稳定,原因何在?如何解决?
,虽然分离情况仍可以,但保留时间不重现,为什么?
,请问为什么?

?
(polyetheretherketone)管路和接头需要注意什么问题?
?




?
?
?
?
,还有哪些因素能引起压力改变?
、弱溶剂?
?
?
?
?
?
“胖"峰和平头峰?怎样避免?
?
?
?
?
?
?
“无限直径效应"?
?
?
,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?
关于漂移问题:
①温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定
②流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等
③柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡
关于快速变化问题
①流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定
②泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。
③流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合
?
①筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。
②存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子
③可能柱超载,减少进样量。

①样品量不足,解决办法为增加样品量
②样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
③样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器
④检测器衰减太多。调整衰减即可。
⑤检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数
⑥检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。
⑦检测池中有气泡。解决办法为排气。
⑧记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。
⑨流动相流量不合适。调整流速即可。

⑩检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。
,柱压不稳定,原因何在?如何解决?
①泵内有空气,解决的办法是清除泵内空气,对溶剂进行脱气处理;
②比例阀失效,更换比例阀即可;
③泵密封垫损坏,更换密封垫即可;
④溶剂中的气泡,解决的办法是对溶剂脱气,必要时改变脱气方法;
⑤系统检漏,找出漏点,密封即可;
⑥梯度洗脱,这时压力波动是正常的。
,虽然分离情况仍可以,但保留时间不能重现,为什么?
这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。尽管过去几年来,填料的制造技术有了极大的提高,但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此,同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物,如三乙基胺(TEA),将会使硅醇基的成键能力饱和,从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。
如分离情况可以,系统稳定,达到系统适用性要求,就不必保留时间的重现。
,请问为什么?
柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。
①拆去保护预柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查;
②把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降,否则是管路堵塞,