高效液相色谱仪.doc

高效液相色谱仪
故障6 峰面积重复性不佳。
原因(1) 进样阀漏液; (2) 加样针不到位。
处理对于第一种情况更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD 状态转换到INJ EC T 状态,以保证进样量的准确。日常工作中,液相色谱仪的保养非常重要, 如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中, 储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液,每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净,防止无机盐析出或沉积; 样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质, 完全溶解,尽量减少对色谱柱的污染, 以延长色谱柱的使用寿命, 同时避免注射过浓的样品溶液, 以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记,用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。
色谱图最主要的几个参数:保留时间峰面积分离度拖尾因子理论塔板数
前面两个(保留时间Rt,峰面积A)可以直接得到;
分离度(resolution):表示两个相邻色谱峰的分离程度。计算公式:R=2(Rt2-Rt1)/(W1+W2) Rt1 Rt2 分别表示峰1 峰2 的保留时间,W1 W2 分别表示两峰的底峰宽,分离度R≥ 表示两峰完全分开。
拖尾因子:表示色谱峰的对称程度 T(拖尾因子)=
%峰高处的峰宽,d1为峰顶点至峰前沿之间的距离
《中国药典》-,
为前延峰,。
理论塔板数(theoretical plate number),用于定量表示色谱柱的分离效率
理论塔板数=*(Rt/)^2 Rt 为保留时间
也可以表示为:N=16*(t/w )^2。其中,t是溶质从进样到最大洗脱峰出现的时间,w为该溶质的洗脱峰在基线处的宽度。
一、脱气的必要性
流动相脱气是HPLC系统能得到可靠数据的一个很有效的措施。HPLC泵在输送液体时要产生很大的力量,由于气体的压缩比与液体相比大的多,因而当气泡存在时,我们发现瞬间的流速降低和系统压力下降,如果这个气泡足够大,液相泵将不能输送任何溶剂,而且如果压力低于预先设定的压力低限,泵将停止工作。当一个气泡通过输液泵时,由于系统压力大,气泡通常会溶解在流动相溶液中,随流动相通过柱子,但是到达检测器流通池时,系统压力又恢复到了大气压,因而气泡可能在检测器流通池中又显现出来,在色谱图上会出现不规律的毛刺。因此,为了保证高效液相色谱结果的准确性,脱气是一个相当重要的环节。
二、脱气方法
1. 吹氦脱气法
利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性,,以约60mL/min流速通入流动相储液容器中10~15min,可以很有效地从流动相中排除溶解的空气,能排除接近80%的氧气。采用一个高效分布式喷射流装置,一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排除。这意味
着1L氦气通过1L流动相就可完成排气这个工作。这种脱气方法虽然好,但氦气价格较高,很少使用。
2. 加热回流法
此法的脱气效果较好。在操作时要注意冷凝塔的冷却效率,否则溶剂会丢失,混合流动相的比例会有变化。
3. 抽真空脱气法
此法可使用真空泵,~,即可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成发生变化,从而影响到实验的重现性,因此多用于单溶剂体系的简单分析。
4. 超声波脱气法
将欲脱气的流动相置于超声波清洗器中,用超声波震荡10~20min。此法的脱气效果最差。
5. 在线脱气法
HPLC仪器均可配置专门的在线脱气机。在线脱气使用简单,低故障,有效
1、打开计算机,进入Windows NT (或Windows 2000)画面,并运行Bootp Server程序。
2、打开 1100 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后,双击Instrument 1 Online图标,化学工作站自动与1100LC通讯,进入的工作站画面如下所示。
4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”,“Show status toolbar”,“System diagram
”,”Sampling diagram”,使其命令前有“√”标志,来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开Purge阀。
7、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入泵编辑画面。 8 、设Flow:5ml/min,单击OK。
9、单击Pump图标,