白藜芦醇的提取及对人脐静脉血管内皮细胞保护作用的的研究.pdf

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作者签名:孤责峭日期:厶哆年弘啬娟��学位论文版权使用授权书长沙理工大学学位论文原创性声明�耊��日期:九/弓年�卤先�本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名:本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权长沙理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。本学位论文属于�⒈C芸冢��年解密后适用本授权书。�⒉槐C芡拧��朐谝陨舷嘤Ψ娇蚰诖颉啊獭�导师签日期:扣���日
摘要葡萄作为世界上产量最大的水果作物之一,��年���萃臣剖澜缙咸�年产量达到了��.�騮,其中中国��年葡萄产量高达��騮,越居世界第一位。在这些葡萄加工中,会产生约占葡萄加工量的�%~�%的皮渣等副产物,其中主要有葡萄皮、果梗、种子等。白藜芦醇虽然已经至少在�种植物中存在,但各植物中含量很低,而红葡萄中白藜芦醇的含量最高,为����/��渲�葡萄皮中含量最高。白藜芦醇具有抗肿瘤、保护心血管、抗氧化、抗衰老、保护坤�经系统、抗菌、抗炎等药理作用。从葡萄皮中提取白藜芦醇即变废为宝,同时又能创造出重要的社会效益。因此研究葡萄皮中白藜芦醇的提取工艺及白藜芦醇对细胞损伤的保护作用,具有重要意义。本文采用有机溶剂振荡法及复合酶辅助有机溶剂振荡两种方法来提取葡萄皮中的白藜芦醇,采用正交试验、响应曲面法等试验分析手段,分析提取时间、有机溶剂的浓度、提取温度、加酶量、酶处理的时间和温度等多个因素对提取量的影响,以获得提取白藜芦醇最佳的工艺。另外,本课题以人脐静脉血管内皮细胞为材料,用��诱导其凋亡,建立细胞凋亡模型,并研究白藜芦醇对��细胞损伤的保护作用。论文以赤霞珠葡萄皮为原料,首先研究了乙醇振荡提取葡萄皮中白藜芦醇的最优工艺,在单因素试验基础上采用正交试验分析了乙醇浓度、浸提温度和浸提时间对提取量的影响,结果显示,这三个因素的主次顺序为:浸提温度�掖寂�度��崾奔洌�⒂烧�皇匝榛竦昧艘掖颊竦刺崛∑咸哑しǖ淖钣盘跫��匆掖�的浓度�%,浸提时间�,浸提温度�℃,白藜芦醇的提取量达到了�����痝。由于单独的乙醇振荡提取葡萄皮中白藜芦醇的提取量不是很高,本文重点研究了复合酶辅助乙醇振荡提取葡萄皮中白藜芦醇的最优工艺,在该方法中,乙醇浓度、浸提时间和浸提温度均与乙醇振荡提取法中保持一致,只是考察了复合酶水解的条件,即加酶量、酶解温度、酶解时间和�,在单因素实验基础上,由��瓸���设计试验,用响应曲面法对实验结果进行分析,获得了提取白藜芦。醇的最优条件,即加酶量为���/�⒚附馕露���、��褪奔���颂跫�下提取量的预测值为����癵/�6�诖颂跫�陆��次实验,测得的白藜芦醇
提取量均值为��.�/比�痝,与理论预测值��.���痝相对误差很小。该提取方法的提取效果较好,其提取量是直接乙醇振荡提取的���丁�此外,本文研究了白藜芦醇对��诱导��损伤的保护作用,主要从细胞生长活力、细胞的凋亡率及细胞周期蛋白�的表达方面进行了研究。结果为:��邹悸ù伎梢约跚酘�����/�对��细胞生长活力的抑制作用:��觳饨峁�允荆���/���拇�怼����/���拇�怼����疞��拇�矸直鹗股�媛蚀��.��.��ヌ岣叩��.�士���%、�����.��%和������.�������;��邹悸ù伎梢越档虷��訦��赴�牡�亡率:流式细胞仪结果显示,���疞的白藜芦醇能显著降低��诱导的��的凋亡���.�士���%降为�����.��ィ琍�.������疞的白藜芦醇使细胞的凋亡率降低至�.�土���%��.����白藜芦醇能够上调��诱导的��损伤的细胞周期蛋白������基因的表达:通过荧光定量���检测细胞周期蛋白�����基因的表达,��峁�允荆�����在����疞��处理组的表达量是细胞正常对照组的���叮�����/�����甿�/��组使其表达量提高到正常对照组的���叮�窗邹�芦醇上调��诱导细胞损伤的细胞周期蛋白������基因的表达。关键词:葡萄皮;白藜芦醇;乙醇振荡提取;复合酶;人脐静脉血管内皮细胞;细胞损伤
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