山莨菪碱治疗兔创伤性急性肺损伤分子生物学机制的实验研究论文.doc

山莨菪碱治疗兔创伤性急性肺损伤分子生物学机制的实验研究论文.doc山莨菪碱治疗兔创伤性急性肺损伤分子生物学机制的实验研究论文
简文,樊爱琳,尹文,戚好文,柏长青
【摘要】目的:探讨山莨菪碱(6542)对家兔创伤性急性肺损伤(ALI)治疗作用的分子生物学机制. 方法:采用创伤性急性肺损伤模型,将家兔随机分为对照组(CG),肺损伤组(IG)和治疗组(EG),每组24只. 各组动物分别于肺损伤模型建立后1, 2, 3, 4 ,用ELISA法检测BALF上清中TNFα和IL8的含量. 结果:IG NFκB活性、TNFα mRNA表达及TNFα, IL8含量于模型建立后1~4 h内均明显高于CG(P );EG经山莨菪碱治疗后上述指标与IG相比均有明显下降(P , P ). 结论:山莨菪碱对ALI有治疗作用,此作用与其对NFκB活性及TNFα mRNA, TNFα, IL8表达抑制有关.
【关键词】山莨菪碱;创伤;急性肺损伤;核因子κB;细胞因子
0引言
TNFα等细胞因子的释放及其介导的炎症反应在急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的发生、发展中起重要作用[1]. NFκB是一种基因转录调节蛋白,通过调控TNFα和白细胞介素等细胞因子的转录,在炎症、免疫、急性期反应中发挥重要作用[2]. 山莨菪碱是一种植物药,在休克、全身炎症反应综合征的治疗中,显示出一定的保护作用[3]. 此类药物在AIL的防治中也有一定的价值,但作用机制尚不明了[4]. 我们采用分子生物学技术对山莨菪碱治疗创伤性ALI时NFκB活化、TNFα mRNA表达及BALF中TNFα, IL8的释放进行研究,探索其治疗创伤性ALI的可能机制.
1材料和方法
,雌雄不拘,~ kg,由本校动物实验中心提供. haride(O111:B4,LPS,Sigma);NEPERTM试剂盒(Pierce);Gel Shift Assay 试剂盒(Promega);γ32P ATP(北京亚辉生物医学工程公司);Trizol Reagent(Gibco);RNA PCR试剂盒(大连Takara);ELISA试剂盒购自本校基础部免疫学教研室.
,随机分为正常对照(Control group,CG)、创伤性急性肺损伤(Injury group,IG)和山莨菪碱治疗(Experimental group,EG)3组,每组24只. IG, EG动物LPS注射联合撞击,建立创伤性急性肺损伤模型,CG不做胸壁撞击,静注等量生理盐水代替内毒素. EG动物于模型建立后立即予以山莨菪碱2 mg/kg iv,随后以1 mg (kg/h)维持,CG和IG分别予以等量生理盐水,剂量与方法同EG. 各组分别于模型建立后1, 2, 3,.freelL/次,共10 mL,回收率70%左右. 将BALF 1000 r/min离心10 min,沉淀用PBS液洗涤后用RPMI 1640培养液悬浮,置于25 mL培养瓶中,37
℃,50 mL/L CO2孵箱中培养1 h,收集贴壁细胞,计数、瑞氏染色证实为巨噬细胞,纯度 95%,台盼蓝排斥试验鉴定细胞活力 90%.
κB