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荧光定量RT-PCR 检测AFP mRNA 基因表达方法
01
02
03
04
目录 CONTENT
实验
目的
实验
原理
实验步骤及可能结果
荧光定量RT-PCR应用
实验目的
实验步骤及可能结果
实验原理
原发性肝细胞癌(HCC)严重威胁人类健康, 由于肝癌细胞容易侵犯血管, 易发生血行转移。
定量检测AFP m RNA 对于早期发现外周血的肝癌细胞、判断肝癌的复发转移、治疗效果及预后具有重要意义。
RT-PCR 是一种非常敏感的检测方法, 但无论竞争RT-PCR 还是内源性参比基因RT-PCR 定量法, 他们均属PCR 终点检测法, 在PCR扩增的指数期和平台期产量相差极大, 很难对起始模板数准确定量。
本实验运用荧光定量RT-PCR 技术建立了定量检测肝癌细胞AFP mRNA基因表达水平的方法。
荧光定量RT-PCR应用
实验步骤及可能结果
实验原理
实验目的
一、实时荧光定量PCR(FQ-PCR)
01
荧光染料
02
荧光共振能量转移
03
PCR扩增及其监测
04
实时荧光定量PCR定量原理
05
实时荧光定量PCR优缺点
荧光定量RT-PCR应用
实验步骤及可能结果
实验原理
实验目的
荧光基团通常各有单一的的光吸收峰,荧光基团吸收激发光的能量后通常以3种方式释放出能量。
(1)光能
(2)热能
(3) 转移给邻近的分子
01
荧光染料
荧光定量RT-PCR应用
实验步骤及可能结果
实验原理
实验目的
当某个荧光基团的发射光谱与另一个荧光基团的吸收光谱发生重叠,且两个基团距离足够近时,能量可以从短波长(高能量)的荧光基团传递到长波长(低能量)的荧光基团,实际相当于将短波长荧光基团释放的荧光屏蔽(猝灭)。
02
荧光共振能量转移
荧光定量RT-PCR应用
实验步骤及可能结果
实验原理
实验目的
荧光PCR的独特之处在于PCR过程中利用荧光染料在激发光下释放的荧光能量的变化直接反应PCR扩增产物量的变化。由于荧光信号变量与扩增产物变量成正比,通过足够灵敏的自动化仪器对荧光进行采集和分析,能够实现对PCR过程的检测,达到对原始模板定量的目的,主要采用以下数种模式:
03
PCR扩增及其监测
01
仿溴乙錠着色监测
02
荧光标记引物
03
荧光标记探针
荧光定量RT-PCR应用
实验步骤及可能结果
实验原理
实验目的
荧光染料(如SYBR Green I)直接嵌入扩增产物DNA双股螺旋链中,通过对特定方向的强荧光检测或的信号。这种模式能特异性地区分单链、双链DNA(只与双链DNA结合),缺点是已产生非特异信号,且本底较高。
03
PCR扩增及其监测
01
仿溴乙錠着色监测
荧