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细胞凋亡与肝脏疾病论文.doc细胞凋亡与肝脏疾病论文
.freelmedcelldeath,PCD)。细胞凋亡的特点:(1)细胞变小,核固缩,细胞膜完整。(2)核碎裂,DNA断裂成180~200bp,而且有蛋白质和mRNA的合成。(3)膜包绕的凋亡小体形成(在肝细胞称为Councilman小体)。(4)凋亡小体被邻近巨噬细胞吞噬,这整个过程进展非常快,由数分钟到几个小时[1]。(5)一般周围无炎症反应,但如果凋亡速度大于清除速度,则组织结构被破坏而且伴随炎症反应[2]。与凋亡不同,坏死是一个被动过程,坏死细胞变大,核溶解,膜通透性改变,线粒体结构变化,DNA随机断裂,其间没有蛋白质和mRNA的合成,坏死周围有炎症反应。(1)对细胞凋亡形态学的观察有HE染色光镜观察以及电子显微镜、相差显微镜、共聚焦激光扫描显微镜检查。(2)对DNA降解片段的分析有琼脂糖凝胶电泳检测DNA以及SouthernBlotting方法。(3)荧光标记膜蛋白V的检测[3]。(4)流式细胞技术(FCM)可以对活体或已固定的凋亡细胞进行定量分析。(5)末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记术(TUNEL)。(6)免疫组化。2凋亡机制细胞凋亡的生化特点包括质膜磷脂排列方向改变、细胞内离子环境自稳改变、蛋白酶和核酸内切酶激活分别致细胞蛋白质裂解和DNA断裂、细胞内产生神经酰胺(ceˉramide)、线粒体功能障碍、谷胱甘肽耗竭以及转谷氨酰胺酶(transglutaminase)激活[1,4]。参与引发细胞凋亡的蛋白酶有多种,包括半胱氨酰天门冬氨酸特异蛋白酶(CASPSE,cysteingylaspartasespecificproˉtease)家族成员和组织蛋白酶等[5]。特别是caspase家族成员与细胞凋亡关系最为密切,至少有14种哺乳动物caspase已获克隆,但仅对caspase-3和caspase-8的功能有所了解。caspase-8在细胞凋亡中发挥启动作用;caspase-3在细胞凋亡中发挥效应作用[6]。由于各caspase可相互激活,所以caspase蛋白酶级联反应(caspaseproteasecascade)是导致细胞凋亡结构改变的主要环节。线粒体功能障碍在细胞凋亡发生机制中起关键作用[6],能促进线粒体功能障碍的因素很多,包括各种有害刺激和信号传递过程,其中某些配体/受体相互作用最为重要。配体与靶细胞表面受体相结合,就导致复杂的多蛋白复合物(multiproteinplex)形成,即将凋亡信号传递给效应蛋白酶FLICE(Fas-associatedproˉteinlikeinterleukin-1βconvertingenzyme,Fas相关性蛋白样白细胞介素1β转化酶),FLICE与caspase-8相互反应可激活caspase-8,caspase-8激活后就通过某些不明的机制引发线粒体功能障碍。线粒体功能障碍导致细胞色素C释放,细胞色素C与凋亡激活因子-2(apoptosisactivatingfactor-2,Apaf-2)相结合,使caspase-3激活[7]。caspase-3又激活DNA断裂因子(DNAfragmentationfactor),导致静息状态的核酸内切酶激活,最终引起DNA断裂。从线粒体功能障碍到DNA断裂,是细胞凋亡生化途径的共同途径。