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免疫组化显色系统
Visualization Systems of
Immunohistochemistry(IHC)
免疫组化技术原理
用标记物或显色物标记抗体或抗原
通过免疫学中的抗原与已知抗体反应来检测组织或细胞内的抗原成分
免疫组化染色是一项综合性技术
组织材料的准备
免疫组化染色前处理
免疫组化染色(一抗, 显色系统)
免疫组化原理图标注解
一抗 1
一抗 2
抗兔二抗
抗鼠二抗
组织抗原1
抗原2
过氧化物酶
碱性磷酸酶
双染阻断剂
显色剂(棕色)
显色剂(红色)
葡聚糖骨架分子
回顾过去
直接法
二步间接法
三步间接法
酶免疫复合物法
链亲和素-生物素法(ABC)
目前常用的显色系统
一步法: EPOS ( Enhanced Polymer One-Step Staining)
二步法: EnVision Systems
双染: General Doublestain
三步法: LSAB (Labeled Sstreptavidin-biotin)
催化放大系统:CSA (Catalyzed Signal Amplication System)
动物研究试剂盒: ARK (Animal Research Kit)
一步法EPOS
原理:
. 这种一抗与抗原结合后即可直接显色.
多聚骨架分子
特异性一抗
组织抗原
过氧化物酶
一步法EPOS
主要实验流程
组织片脱蜡,水化
阻断(S2001)
TBS冲洗(S1968)
一抗/HRP(U…)
TBS冲洗(S1968)
显色剂 DAB或AEC(K3467或K0697)
水漂洗
素木精复染(S3309)
二步法EnVision
原理:
在葡聚糖大分子上标记二抗及酶, 将传统的二抗和三抗(酶)连接在一起,形成一个复合物EnVision. 两步孵育完成免疫组化.
二步法EnVision
原理图
一抗与抗原结合
EnVision二抗复合物与一抗结合