小鼠P16INF4a基因外显子1a胚胎干细胞打靶分析.pdf

第二军医大学
博士学位论文
小鼠P16<'INF4a>基因外显子1a胚胎干细胞打靶研究
姓名:龚振明
申请学位级别:博士
专业:遗传学
指导教师:傅继梁

缩写词表�������’������������第二军医大学�级遗传学专业龚振明博士学位论文�������������������������������—
摘要�钠胀ù虬性靥搴吞跫�虬性靥濉U蛑衅胀ù虬性靥宥瘫�.���け���觥盎�蜃镈�片段。附此片段��啊笆欠窬哂兄琢鲆种乒δ艿淖钪苯佣�行У耐揪丁!��多肽的实例。外显子���、�嗦雙�”。�型槐涞氖率怠G�本研究根据已报道的小鼠��啊盎�虻谝煌庀宰蛹捌渖嫌涡蛄校�肞��测序后进行生物信息学分析表明:其结构中含有与转座和同源重组有关的成分,提示了部分肿瘤细胞中���盎�蚴Щ畹目赡茉�颉!�标记���蛲�鄙境�6��������┭≡窈筇粞〕隹挂┬钥寺��觯�竦靡桓鼍璖����咏����疉�基因位点是高等动物中迄今已知的唯一通过基因重叠编码二个��、�嗦雙���,外显子�敲除外显子��的小鼠虽然能够成活和繁殖,但在生长发育早期就发生肿瘤。�男∈蟮谋硇陀肭贸�送庀宰�,�男∈蠹负跬耆�嗤�U�些结果对��⋯�侵琢鲆种苹�虻墓鄣闾岢隽颂粽健�如果不是��啊岸�莗�”具有抑制肿瘤的作用,就很难解释人类�%以上的肿瘤与��啊笆Щ钣辛O担��负醮游捶⑾滞庀杂��⒐鄄靝�““特异性缺失小鼠的肿瘤易感性可能是探明小鼠设计引物,以��细胞基因组��D0澹�肞�扩增产物作探针筛选小鼠基因组文库,获得�.�利用筛选文库得到的���巍I杓撇⒐菇�苏攵孕∈髉�⋯“基因外显���。条件打靶载体短臂�甇�,长臂���,在距外显子��鹗济苈肷嫌��械愦Σ迦氲谝桓鰈��辉诰嗤庀宰觢�鹗济苈胂掠�����械愦φ�虿迦氲诙�鰈��>瑿�介导后可将外显子�条件打靶载体线性化和电泳纯化后用于对�细胞电穿孔,经��和鉴定的阳性克隆。关键词:����:基因打靶敲除了外显子�除外显子����腒��的���脱≡��疭�子�第二军医大学�级遗传学专业龚振明��博士学位论文/,
以�������埃甅����啊盿���薄埃瑂�������竧���薄埃甀�����.�����副���������畐����%�������疉������������.������������甊�������甴���������“�����啊眀���““����������’���也���.�����猲�����騛������琣���甌�����畊������瓵�.���疭������瓸���������““�����������.�鹠���疉��/�����.���琗��疦���甇���瓸���莂�������������畊�����瓵����—����������������簆第二军医大学�级遗传学专业龚振明博士学位论文��軲���.�癒�;��
舂日�—�稀�!狶活密切相关。从这个意义上看,恶性肿瘤是一类典型的基因疾病。的磷酸化并能使一些小鼠细胞系�鏝���转化。活化的���蚧鼓艽俳��常野生型成纤维细胞分裂,但这种异常分裂信号很快被细胞内的监视系统察觉并胞过度分裂和永生化【��薄U�G榭鱿拢琈�过量表达可激活��暗淖B迹�婧�通过��保痯�途径诱导细胞凋亡。显然,如果细胞中癌基因活化,而抑癌基因瘤的发生和发展。��⋯�蚿�”兼有控制细胞生长和促进细胞凋亡的功能,因随着对肿瘤发病机理研究的深入。越来越多的证据表明:肿瘤的发生、发展和转归与癌基因�鏡�和��的活化及抑癌基因�鏿���和���的失���蚴亲钪饕5陌┗�颍�渲掳┬员纫阎5娜魏纹渌�┗�蚨几摺�琑�基因的活化与人类�%的肿瘤有关。活化的���蚰艽俳�赴�至押痛俳鴓�激活��啊昂蚿�”表达,使异常分裂细胞提早衰老而被清除。��浅齊�外在人类肿瘤中最常见的活化癌基因。它是一种转录因子,具有促进细胞分裂的功能。但当其因基因扩增或基因重排而过量表达时,可以通过促进���—���~�����虰、端粒酶催化亚单位等基因的表达而促进细失活,则细胞就会恶性转化。已知的抑癌基因至少有�个������������∞��菀职┗�虻墓δ芙�浞治?疵呕��������和照顾基因������两类,它们分别通过控制细胞生长和促进细胞凋亡而抑制肿而倍受重视。许多证据表明:��啊暗氖Щ钣胫琢龅姆⑸�头⒄褂泄亍J紫龋�死嘈矶嘀�瘤的发生与染色体��的缺失有关”��鴓�““基因恰恰位于��。第二,对����笔А⑼槐洹⒓谆���哂幸吧�蚿�的肿瘤,外源性高水平��眓��诱导�期细胞周期抑制泞���谌�琾�。“�毕莸男∈笠谆寄承┒裥灾琢觯�谒�细胞瘤和胰腺癌易感家族都伴有生殖系��“��蛲槐洹�“”�����������。第二