高效液相色谱法.ppt

第十章高效液相色谱法high performance liquid chromatography;HPLC
第一节概述
第二节色谱柱
第三节流动相
第四节高效液相色谱仪
第五节在药物分析中的应用
经典液相色谱法为基础,
引入气相色谱法的理论和实验技术,
高压输送流动相,
高效固定相及高灵敏度检测器,
现代液相色谱分析方法。
第一节概述
1. 与经典液相色谱方法比较
高速:HPLC采用高压输液设备,流速大大增加,分析速度极快,只需数分钟;而经典方法靠重力加料,完成一次分析需时数小时。
高效:填充物颗粒极细且规则,固定相涂渍均匀、传质阻力小,因而柱效高。可以在数分钟内完成数百种物质的分离。
高灵敏度:检测器灵敏度极高:UV—10-9g, 荧光检测器—10-12g。
一、HPLC的特点
2. 与GC比较
分析对象及范围:GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物,而这些物质只占有机物总数的20%;HPLC可以分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物,这类物质占有机物总数的80%。
流动相的选择:GC采用的流动相中为有限的几种“惰性”气体,只起运载作用,对组分作用小;HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合,可供选择的机会多。它除了起运载作用外,还可与组分作用,并与固定相对组分的作用产生竞争,即流动相对分离的贡献很大,可通过溶剂来控制和改进分离。
操作温度:GC需高温;HPLC通常在室温下进行。
二、主要类型
六类基本类型色谱法
液-固吸附色谱法
液-液分配色谱法
离子交换色谱法
分子排阻色谱法
离子抑制色谱法
反相离子对色谱法
(一)液-固吸附色谱法
以硅胶、氧化铝、高分子多孔微球、分子筛及聚酰胺等作为固定相。
适用于非离子的、水不溶的化合物以及几何异构体的分离分析。
(二)液-液分配色谱法
是应用最广泛的色谱法。
早期多采用机械涂渍或物理涂渍的方法,固定液易流失、色谱柱短。
现多采用化学键合的方法键合在载体表面,是目前应用最广、性能最佳的固定相。
(三)离子交换色谱法
固定相有物理涂渍型离子交换树脂和离子交换键合相两种类型。
主要用于分析无机与有机离子、氨基酸、糖类以及DNA、RNA的水解产物等。
(四)分子排阻色谱法
利用凝胶对分子大小不同的组分分子有不同的阻滞作用而进行分离、分析的方法。
主要用于分离相对分子质量大的化合物。