一、免疫沉淀类试验.ppt

第一部分免疫沉淀类实验
微生物与免疫教研室
一、抗原抗体制备技术
抗体:是B淋巴细胞接受抗原激活后增殖分化为浆细胞所合成分泌的一类能与相应抗原特异性结合的、具有免疫功能的球蛋白。
单克隆抗体:由一种抗原决定簇刺激机体,由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体。
多克隆抗体:由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,机体内所产生的抗体就是多克隆抗体。
抗体制备分三个阶段


血清分离纯化与鉴定
抗原
抗原:是一类能够诱导机体免疫应答并能与相应抗体或T细胞受体发生特异反应的物质。具有免疫原性和免疫反应性。
不同的抗原,其免疫原性的强弱均不相同,这种免疫原性的强弱取决于抗原的分子量、化学活性基团、立体结构、物理形状和弥散速度等。
,分为完全抗原和不完全抗原。
、类脂抗原、多糖抗原和核酸抗原。
。常见的颗粒性抗原主要是细菌或动物细胞。
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动物的选择
动物的选择常根据抗体的用途和量来决定,也与抗原的性质有关。
一般,抗原来源与动物种属差异越大,免疫原性越强,免疫效果越好。
免疫用的动物需选择适龄、健康、体重合适的动物,最好为雄性。由于对免疫应答的个别差异,免疫时应同时选用数只动物进行免疫。
实验室制备抗体,多选用家兔和绵羊。
抗原剂量的选择
小鼠首次抗原剂量为:50-400μg/次
大鼠为100-1mg/次
兔子为200-1mg/次
加强免疫的剂量为首次剂量的1/5-2/5
途径
免疫剂量与注射途径有关,一般而言,静脉注射剂量大于皮下注射,而皮下注射又比掌内和跖内皮下注射剂量大,也可采用淋巴结内注射法。
绵羊红细胞的制备流程图
摇动
15-20min
4℃
可保存3周
取适量
NS洗涤3次
2000r/min
10min
NS稀释至
2~5%
细菌细胞抗原的制备流程图
液体培养或
斜面培养
37℃24h
100℃水浴
45min杀菌
无菌试验
NS稀释成 10亿/ml
O菌体抗原
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颗粒性抗原多克隆抗体的制备 --伤寒杆菌O抗血清的制备
1、伤寒杆菌O抗原的制备:
接种
37℃
18-24h
洗下菌苔(%苯酚的NS)
100℃ 45min
离心
4000rpm,10min
得到原液
稀释
109/ml应用液