生化实验--质粒DNA提取.ppt

质粒DNA的小量快速提取(碱裂解法)
实验背景
1、质粒是染色体外的DNA分子,大小为1KB~200KB
2、大多数来自于细菌的质粒是双链、共价闭合环状的分子,以超螺旋形式存在。它是细菌内的共生型遗传因子。
3、其复制和遗传独立于细菌染色体,但复制和转录依赖于宿主编码的蛋白和酶。
2、严瑾型质粒:严瑾型质粒的复制需要一个质粒编码的蛋白,质粒的拷贝数不能通过氯毒素等蛋白合成抑制剂来增加。
质粒类型
质粒按复制方式可以分为两种类型:
1、松弛型质粒:松弛性质粒的复制不需要质粒编码的功能蛋白,完全依赖于宿主提供的半衰期较长的酶,即使蛋白质合成受到抑制,质粒的复制依旧进行。
质粒的应用
1、大多数基因工程使用的是松弛型质粒
2、严瑾型质粒用来表达一些可使宿主细胞受毒害致死的基因。
3、质粒的特点使质粒成为外源基因进入细菌中扩增或表达的重要媒介物,这种基因工具在基因过程中具有极其广泛的应用价值。
质粒的性质中与载体作用关系密切的包括:
1、质粒的复制型2、质粒的不相容性
3、质粒的接合性
4、多克隆位点
5、筛选标记
1、质粒能在细菌中垂直遗传,并且赋予宿主细胞一些表型,是比病毒更简单的原始生命。
质粒通过细菌的结合作用,从雄性体转移到雌性体,是细菌有性繁殖的性因子,1952年由Lederburg正式命名为质粒。
质粒特点
质粒对细菌本身的生长繁殖不是必需的,但可以赋予细菌一定的表型,如抗药性等。
它是基因操作工程中常用工具中载体的一种。是携带目的DNA片段进入受体细胞进行扩增和表达的工具。
人工基因工程获得胰岛素
首先获得胰岛素基因,再将胰岛素基因转入大肠杆菌内,再创造大肠杆菌增殖的有利环境,对大肠杆菌进行大规模培养,使之产生大量的治疗糖尿病的药物--胰岛素,提取纯化。
分离质粒DNA的方法
从大肠杆菌中分离质粒DNA的方法众多,目前常用的有:
1、碱裂解法
2、煮沸法
3、SDS法
4、羟基磷灰石层析法
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