The non-coding RNA TERRA PPT课件.pptx

The non-coding RNA TERRA_PPT课件The non-coding RNA TERRA is a natural ligand and direct inhibitor of human telomerase
Sophie Redon, Patrick Reichenbach and Joachim Lingner
Nucleic Acids Research, 2010
1. TERRA 在细胞核中与端粒酶结合
2. TERRA 与端粒RNA 相互作用
3. TERRA 是端粒酶的抑制剂
4. TERRA 抑制端粒酶活性的机制
5. TERRA 对端粒酶活性的抑制作用与3’端序列无关
1. TERRA 在细胞核中与端粒酶结合
A. 免疫共沉淀。293T 细胞转染Myc-hTERT/hTR 与对照组,用tubulin (Tub)、
hnRNPA1 (A1) 、Myc 做免疫共沉淀,用Myc 和hnRNPA1 做Western blots 检测。
B. RT-PCR。 293T 细胞转染pBS-U1-hTR /pCDNA6MychTERT与对照组。用RT-PCR检测TERRA 和hTR,结果Myc 和RNPA1共沉淀组有TERRA和hTR 的条带,说明TERRA和hTR 与端粒酶和RNPA1 形成复合物。
2. TERRA 与端粒RNA 相互作用
用35S 标记hTERT,32P 标记TERRA 包含的RNA (UUAGGG)3和DNA (TTAGGG)3 ,用Myc 免疫共沉淀,检测端粒酶和TERRA。结果:
(1)hTR互补和突变组, (UUAGGG)3降低,说明(UUAGGG)3 与端粒RNA通过配对结合到端粒酶。
(2) 在无hTR 或者突变hTR 组, (UUAGGG)3 减少但仍然存在,说明(UUAGGG)3 同样与hTERT 结合。
(3)用()3 p 结合。
(4) (TTAGGG)3 有同样的作用,但是结合很弱。
(UUAGGG)3A6 RNA 和(TTAGGG)3A6 DNA与端粒酶相互作用。端粒酶与(UUAGGG)3相互作用,也可以与(UUAGGG)3A6 相互作用,结合效率相似。说明端粒酶既可以与末端(UUAGGG)3 结合,也可以与内部的(UUAGGG)3 结合。
3. TERRA 是端粒酶的抑制剂
在端粒酶中加入(UUAGGG)3 ,检测端粒酶的活性,随着加入量的增加,端粒酶的