野生艾蒿的组织培养.docx

野生艾蒿的组织培养
杨莹, 吴琼, 徐碧莲, 刘志文
( 大连工业大学生物工程学院, 辽宁大连 116034 )
摘要:为了保护野生艾蒿资源,以带有侧芽生长点的野生艾蒿茎切段为材料,采用植物组织培养方法,对艾蒿茎切段的分化和生根培养进行了研究。结果表明,%的HgCl2浸泡6~8 min对艾蒿茎切段灭菌有较好的效果。6-BA和IAA分别是艾蒿茎切段芽诱导和生根培养理想激素,而茎切段在MS+ mg/L 6-BA+ mg/L IAA的培养基上培养,侧芽能较好萌发生长,生根多并且快,21 d时的增殖系数可达8~15倍。
关键词:艾蒿;组织培养;生根;快繁
0 引言
艾蒿富含人体生命所必需的蛋白质、氨基酸、多种维生素和矿物质,使得艾蒿具有良好的食用性和饲用性[1-2]。此外,还具有黄酮、挥发油、桉叶烷和三萜类等多种重要的化学物质,每一类化学物质又包含多种组分,具有多种药用价值,因而艾蒿也是最具应用潜力的药用植物之一[3-5]。多年来由于人们大量采集,采集时一般连根拔起,使得在野生条件下只能通过根茎进行繁殖的艾蒿繁殖困难,因此野生资源迅速减少[6]。
目前,对于艾蒿的研究多集中于其药用成分分析与提取方面[7-9],少见对艾蒿组织培养研究的报道[10-11]。为保护野生资源,探索快速繁殖艾蒿的方法,以满足人们的不同需求十分必要。本试验应用组织培养的技术,利用野生艾蒿的茎切段进行诱导培养,确定快繁的最佳实验条件,以期保护野生艾蒿资源,为艾蒿的综合利用及食用和药用等提供原料。
1 材料与方法
材料灭菌处理
将采集的艾蒿剪除叶片,用自来水冲洗茎段,除去泥沙等杂物,再将材料剪切成1~2 cm的带侧芽小段。置于75%酒精浸泡30 s,再用不同浓度HgCl2溶液中浸泡不同时间,期间搅拌4~6次,共设8个处理。最后无菌水冲洗3~4次,并用无菌滤纸吸干,将茎切段接入MS培养基,每瓶接2~3段,以获取无菌材料。
细胞分裂素对侧芽生长的影响
将无菌成活的茎切段分别转接至含有6-BA、激动素(KT)和玉米素(Z)的MS培养基上进行分化成芽培养,、、 mg/L 的4种浓度处理。
生长素对生根的影响
将具分枝无菌嫩茎切成长1~2 cm、具有顶芽或侧芽分枝的嫩茎段, mg/L的IAA、IBA、NAA和2,4-D的MS培养基中进行生根培养。
不同IAA浓度对生根的影响
、、 mg/L 的IAA培养基上,进行嫩茎段的生根培养效果试验。
以上3组试验均以不加激素的MS培养基为对照(CK),重复3次。
培养条件和数据分析
所有材料接种后置于光照培养箱内培养,温度设在(25±3) ℃,湿度70%,日光灯连续光照12 h/d,光强3 000 lx的条件下培养。
每5~7 d观察一次,对试管苗死亡率、茎高、生根数和平均根长等参数进行统计,并取其平均值为性状值。
2 结果与讨论
HgCl2质量分数及灭菌时间对外植体灭菌效果的影响
从表1中可以看出,HgCl2的不同质量分数和灭菌时间对外植体感染率和存活率存在较大差异。%% HgCl2灭菌,随着浸泡时间的延长,感