鸡胚接种方法幻灯片.ppt

鸡胚接种技术
公共卫生学院
王德全
一、概况
1911年Rous和Murphy首先应用鸡胚培养研究肉瘤病毒(Rous肉瘤)的繁殖。
等应用鸡胚繁殖病毒、Cox应用卵黄囊培养立克次氏体。
近些年来由于组织培养技术和分子生物学技术的发展,鸡胚培养技术在某些方面已被其他技术所取代,但是其在痘类病毒、粘液病毒和疱疹病毒的分离、鉴定、制备抗原、疫苗生产以及病毒性质等方面的研究上仍然是很重要的。
方法
应用价值
存在问题
动物接种
应用最早;
方法简便;
结果易于观察
自身带病毒;
有的接种后不敏感;
动物饲养问题
鸡胚培养
来源客观,易于管理,带病毒机会少;多途径接种
敏感病毒谱窄
细胞培养
应用广泛,敏感病毒谱广
设备技术要求条件高
病毒分离培养
鸡胚培养法的优点:
1. 它的组织分化程度低,可选择适当途径接种,病毒易复制,感染病毒的膜和液体含大量病毒。
2. 是个整体,有神经血管的分布及脏器的构造。
3. 来源充足,操作简单,通常是无菌的,对接种的病毒不产生抗体。
二、鸡胚的结构与生理
鸡胚是由三个胚层发育起来的,即外胚层,中胚层和内胚层,它们构成胚胎的组织与器官。
(约10日龄鸡胚的结构见图)
气室
鸡胚
卵黄囊
尿囊腔
羊膜腔
绒毛尿囊膜
卵白
卵膜
鸡胚的管理
(一)鸡胚的选择
首选健康莱亨鸡受精卵,其壳洁白易于观察胚胎,其他受精卵也可使用。接种病毒的受精鸡卵应未感染已知病毒或其它微生物(如新城疫病毒或支原体等),最好来自无特定病原体(specified-pathogens free,SPF)鸡群,接种立克次体的受精鸡卵应来自未食用高浓度抗生素的鸡群。
鸡胚的孵育
受精鸡卵孵育时不要擦洗,以免受细菌污染。最好用能自动调节温度、湿度、气流及翻卵的孵卵箱孵育。如没有,也可用普通恒温箱,但要在温箱中放一盛满水的方盘,以保持适当的湿度。孵育应在37℃-39℃、40%―70%的相对湿度下进行。湿度太高会使气室发育过度,而湿度过低又会导致气室发育不良,甚至造成鸡胚死亡。通气也很重要,如果空气不流通,也可造成鸡胚死亡。为了避免胚胎膜粘连和胚胎发育不均匀,应每隔一段时间转动一次受精鸡卵。