微生物实验(生物实验三).doc

生物大实验三《微生物学》部分实验目录
实验一、培养基的配制和灭菌
实验二、微生物的分离、接种及培养法
实验三、水中细菌总数和大肠菌群的检测
实验四、微生物的快速鉴定和自动化分析技术
实验五、抗微生物药物敏感性试验
实验六、微生物的生理生化反应
实验七、微生物菌种保藏
实验八、沉淀反应
实验九、细菌鞭毛染色及其运动的观察
实验十、细菌芽孢、荚膜的染色及观察
实验一、培养基的配制和灭菌
一、实验目的
,并掌握配制培养基的一般方法和步骤。
、分装和灭菌的操作方法。
。
二、实验器材
:
可溶性淀粉,葡萄糖,KNO3,K2HPO4·3H2O,MgSO4·7H2O,FeSO4·7H2O,K2HPO4,1mol/L NaOH,琼脂,牛肉膏,蛋白胨,NaCl,马铃薯

试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸(-)、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、干燥箱、培养皿、涂布棒、吸管(1ml)、玻璃珠、PH试纸
三、实验内容
。
配方:
可溶性淀粉20g NaCl KNO3 1g K2HPO4·3H2O MgSO4·7H2O
FeSO4·7H2O 琼脂 15-25g 水 1000ml pH -

配方:
牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl 5g 水1000ml PH -

配方:
K2HPO4 1g,MgSO4·7H2O ,蛋白胨5g,葡萄糖l0g,琼脂15~20g,水1000mL,自然pH。
配制方法
配制20%马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g,切成小块,加水1000ml。80℃浸泡1h,用纱布过滤,然后补足失水至所需体积。100Pa灭菌20min。即成20%马铃薯浸汁,贮存备用。
配制时,按每100ml马铃薯浸汁加入2g葡萄糖,加热煮沸后加入2g琼脂,继续加热融化并补足失水。
(45ml)三角瓶2个。
()10支。
,6套为一包。
,玻璃刮铲4个。
四、方法步骤
(一)培养基的制备与分装
。可溶性淀粉先用少量热水溶化后再加入其他成份,补足所需水分,混匀后加入琼脂。
。
用1mol/L -。
(本实验勿需过滤)
,装试管时,注意管口不要沾上培养基。液体分装装量不超过试管的1/4,固体分装装量不超过试管的1/5,分装三角瓶的量不超过三角瓶容积的一半,半固体分装装量为试管的1/3,灭菌后垂直待凝。
,在试管口或三角瓶口塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能,然后包扎一层牛皮纸。试管应先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮纸,贴上标签,注明培养基名称、日期、组别。
(二)无菌水的制备
,塞上棉塞,包扎牛皮纸。
,塞上棉塞,包扎牛皮纸。
(三)器皿的准备
,用旧报纸包扎(或放在特制铁皮圆筒里,加盖扣严)。
,用长纸条包扎、打结。
。
(四)培养基、无菌水、器皿的灭菌
、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内,,℃,20min湿热灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。
,将试管培养基冷至50℃左右,将试管棉塞搁在玻棒(或木棍)上,搁成斜面,搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。
℃的温室中培养24~48h,以检查灭菌是否彻底。
,加热灭菌。
五、思考题
,为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养菌是无菌的?
?是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度?为什么?
?
、瓶口为什么要用棉塞?能否用木塞或棉皮塞代替?为什么?
六、实验报告
实验二、微生物的分离、接种及培养法