高效毛细管电泳.ppt

高效毛细管电泳及其在农药分析中的应用
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一、问题的提出
我国现有中药种类已达12807种,其中药用植物11146种,药用动物1581种,,野生中草药远远不能满足市场的需求,,药材生产基地600多个,,,,目前我国人参在海外市场日益受韩国高丽参的排挤等,都有农药残留超标的原因.
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二、CE的装置及基本原理
毛细管电泳仪在实验室中
三、CE的特点
高质量灵敏度:常用紫外检测器的检测限可达10-13-10-15mol,激光诱导荧光检测器(LIF)则达10-19-10-21。。
高分辨率:每米理论塔板数为几十万,高者可达几百万乃至几千万。
高速度:许多分析可在10分钟内完成,有的可在60秒内完成。
所需样品少:只需纳升(10-9升)的进样量。
成本低:只需少量(几毫升)的流动相和低廉的毛细管。
应用范围广:除分离生物大分子(肽、蛋白、DNA和糖等)外,还可用于小分子(氨基酸、药物等)及离子(无机及有机离子等),甚至可分离各种颗粒(如硅胶颗粒等)。
:三高二少一广
四、CE的分离模式
1 毛细管区带电泳(capilary zone electrophoresis,CZE)
CZE的分离机理是基于各被分离物质的净电荷与质量比(荷质比)间的差异。应用范围包括氨基酸、肽、蛋白、离子分析、对映体拆分和很多其它离子态物质的分析。
2 胶束电动色谱(micellar ic capillary chromatography,)
是唯一既能分离中性溶质又能分离带电组分的CE模式。采用表面活性剂(如十二烷基硫酸钠,SDS)在操作缓冲液内形成有一疏水内核、外部带负电的胶束相。利用溶质具有不同的疏水性,在水相和胶束相(准固定相)间分配的差异得以分离。主要用于小分子、中性化合物,手性对映体、各种药物等。
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3毛细管凝胶电泳(capillary gel electrophoresis,CGE)
CGE是将凝胶移到毛细管中作支持物进行的电泳。不同体积的溶质分子在起“分子筛”作用的凝胶中电泳分离。常用于蛋白质、寡聚核苷酸、RNA、DNA片断分离和测序及PCR产物分析。现在还有采用无胶筛分方法,同样可达分离目的。
4毛细管等电聚焦(capillary isoelectric focusing,CIEF)
CIEF是用两性电解质在毛细管内建立pH梯度,使各种具有不同等电点的蛋白质在电场作用下迁移到等电点的位置,形成一非常窄的聚焦区带。已成功用于测定蛋白质等电点,分离异构体或用其它方法难于分离的蛋白质。
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5毛细管等速电泳(capillary isotachophoresis ,CITP)
CITP采用先导电解质和尾随电解质,使溶质按其电泳淌度不同得以分离,是一种较老的方式。现在可作为柱前浓缩方法用于富集样品。
6毛细管电色谱(capillary electrochromatography,CEC)
CEC是将HPLC中众多的固定相微粒填充到毛细管中,以样品与固定相之间的相互作用为分离机制,以电渗流为流动相驱动力的色谱过程。虽然柱效有所下降,但增加了选择性,是一种有发展前景的模式。
五、在农药分析中的应用
1. 定量分析研究
2. 在农药制剂和原药中有效成分的测定
3. 在农药中杂质的分离和测定
4. 手性农药分析
六、应用实例- 毛细管电泳法研究提取剂对黄连-黄柏共煎剂中生物碱含量的影响
样品制备
粉碎-过筛-浸泡-回流-用水提取-提取剂提取
2. 电泳分析
稳定仪器-确定检测波长-选择缓冲溶液-电泳检测