PCR实验室防污染的措施.doc

PCR实验室防污染的措施.docPCR实验室防污染的措施
关键词:PCR;污染;HBV
PCR技术是一种体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术,该技术通过重复高温变性、低温退火、中温延伸等简单的3个温度循环,能将靶DNA扩增数百万倍,获得极高的检测敏感性。但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的结果。如果形成气溶胶污染而扩散,则可引起整个PCR实验室的污染,处理起来非常麻烦,严重的甚至要关闭PCR实验室。我实验室也曾经遭遇过气溶胶的污染,所幸的是经过一段时间的处理,最终将PCR实验室污染排除掉了。现将经过向大家报告如下。
1 实验室情况
实验室设置实验室分为试剂准备区、标本制备区、扩增区三个区,试剂存放在试剂准备区,标本是在标本制备区处理,处理完的标本置于扩增区上机扩增。
使用试剂试剂是由中山大学达安基因股分有限公司提供的乙型肝炎病毒(HBV)荧光定量PCR试剂。
操作人员均经过卫生部临检中心或区临检中心理论和操作培训并通过考试取得合格证。
2 污染的发现
2004年8月12日,我实验室按正常的操作规程检测HBVDNA标本,同时设立了阴性对照和阳性对照(均为试剂盒中配备),扩增结束分析结果时,发现HBVDNA所有的标本及阴、阳性对照均为阳性,提示操作过程中出现污染,但具体是什么原因引起的污染还不清楚。
3 污染源的追踪
出现污染后,我们首先考虑可能是试剂的污染,更换新批号的HBV试剂重新检测后,结果仍然为全部标本阳性。
将HBV标本拿到其他正规的PCR实验室检测,结果标本中阴、阳性结果都有,阴性对照是阴性,阳性对照是阳性,说明标本没有被污染。
将两种批号的HBV试剂拿到其他正规的PCR实验室检测,也显示试剂没有问题。
我实验室用消毒液擦拭工作台面后,打开所有的紫外灯照射一天,将所使用微量进样器、离心管、枪头、手套、记号笔、记录本等都更换掉,再将HBV标本进行检测,结果全部标本仍然为阳性。
用消毒液擦拭工作台面后,打开所有的紫外灯照射一天,将HBV标本重新检测,同时设置了两个阴性对照(A和B),A阴性对照为将试剂的反应管从