红色红曲菌蛋白质组双向凝胶电泳体系的建立.pdf

中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2009,29(4):83~87
红色红曲菌蛋白质组双向凝胶电泳体系的建立
万成许杨李燕萍季宏飞
(南昌大学中德联合研究院南昌 330047)
摘要红曲菌是一种具有较高食用和药用价值的丝状真菌,能够产生红曲色素、莫纳可林 K等多种
生理活性物质。通过分析比较培养基、蛋白质裂解液组成以及水化上样条件对双向电泳结果的影
响,建立了红色红曲菌蛋白质组的双向凝胶电泳体系,为从蛋白质水平研究红曲菌及其次级代谢产
物的生物合成提供依据。结果表明:用 YES培养基培养红色红曲菌 6d,TCA丙酮法提取菌体总蛋
白质,蛋白质裂解液组分为 8mol/L尿素,2mol/L硫脲,4% CHAPS,1% DTT和 2% Biolyte,可获
得蛋白质样点数量多,清晰度高的双向电泳图像,为进一步研究红曲菌蛋白质组奠定了基础。
关键词红色红曲菌双向凝胶电泳蛋白质组学
中图分类号 Q819
红曲菌是丝状真菌的一种,它能够产生红曲色素、 V)SDS,20% (V/V)丙三醇,25% (V/V)
MonacolinK、γ氨基丁酸、麦角固醇等多种具有生物活 TrisHCl()。
性的次级代谢产物[1]。双向凝胶电泳是蛋白质组学的 常用试剂十二烷基磺酸钠、甘氨酸、Tris、浓
三大核心技术之一(双向凝胶电泳、生物质谱、生物信盐酸、氯化钠、冰醋酸、无水乙醇、三氯乙酸(TCA)、丙
息学与蛋白质组数据库),在大规模分离蛋白质方面具酮、β巯基乙醇、丙三醇、二硫苏糖醇(DTT)、磷酸、硫酸
有无可争辩的优势[2]。本实验采用 TCA丙酮法提取红铝、丙烯酰胺、甲基双丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED等
色红曲菌中的总蛋白质[3],所得样品经吸光法定量、双均为国产分析纯试剂,矿物油、载体两性电解质 Biolyte
向电泳和 PDQuest软件分析,建立了红色红曲菌蛋白质(pH范围 3~10)、碘乙酰胺、7cmIPG胶条(pH3~10
组的双向电泳体系,为进一步研究红曲菌蛋白质组,分 NL)购自 BioRad公司,尿素、硫脲、考马斯亮蓝 G250
析蛋白质表达与功能,建立蛋白质数据库奠定了基础。购自 BBI公司,CHAPS购自 Sigma公司。
主要仪器 Sigma冷冻高速离心机、Milipore超
1 材料和方法纯水生成器、BioRadPROTEANIEF等电聚焦仪、Bio
材料 RadMiniPROTEAN3垂直电泳仪、BioRadGS800校准
菌种红色红曲菌 Mr11,由本实验室保存。型光密度扫描仪、PharmaciaULTRASPEC4300紫外分光
培养基 YES液体培养基(4% 酵母浸膏,16 光度计、超低温冰箱、恒温振荡培养箱、水平摇床等。
% 蔗糖),MPPY液体培养基(4% 葡萄糖,% 酵母 方法
红曲菌丝体的培养取保存于-20℃的红色
浸膏,% NaNO3,% KCl)。
蛋白质裂解液 A:8mol/L尿素,4% CHAPS, 红曲菌 11号孢子液,室温下