马面鱼皮胶原抗氧化肽的分离制备及稳定性研究.docx

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摘要：本文从马面鱼皮中提取得到胶原蛋白，使用酶法分离得到抗氧化肽，测定其抗氧化活性和稳定性。结果显示，马面鱼皮胶原抗氧化肽具有较强的抗氧化活性，且在不同温度、湿度和pH值下的稳定性较好，具有很好的应用前景。
关键词：马面鱼皮，胶原蛋白，抗氧化肽，分离制备，稳定性
一、绪论
胶原蛋白是一种重要的结构蛋白，在生物体内具有广泛的分布。其具有良好的生物相容性、生物相似性和生物活性，因此被广泛应用于医药、化妆品、生物材料等领域。近年来，越来越多的研究表明，胶原蛋白中存在一些生理活性肽，具有保健、美容和药用价值。其中，抗氧化肽是一种重要的生理活性肽，具有良好的抗氧化活性和抗衰老作用。
马面鱼是一种重要的海水经济鱼类，其皮下具有丰富的胶原蛋白资源。本文以马面鱼皮为原料，通过酶法分离得到抗氧化肽，并对其进行抗氧化活性和稳定性检测，为进一步开发利用马面鱼皮胶原抗氧化肽提供理论依据。
二、实验材料与方法
实验材料
马面鱼皮：由黄岛某超市购买；
胰蛋白酶：北京中信实达生物技术有限公司；
氨基酸分析仪：日本日立公司；
其它试剂均为分析纯。
实验方法
马面鱼皮的提取及胶原蛋白的分离
将马面鱼皮清洗干净，晾干后切成小块，（pH=），在室温下搅拌4h左右，过滤得到鱼皮透明液，加入2倍体积的乙醇，混合后保持低温静置1h，收集沉淀，用水洗涤至纯净，晾干备用。
将马面鱼皮经过以上处理后得到的胶原蛋白，/L的醋酸铵缓冲液中（pH=），，在37℃下水浴酶解，每30min取一次反应液，含有最多肽的反应液全部收集。
抗氧化肽的分离及纯化
将酶解反应液经过酸沉淀、乙醇沉淀和冰乙酸洗涤等步骤，得到含有抗氧化肽的物质，经过凝胶层析得到相应的纯化产物。
氨基酸分析
取抗氧化肽纯化后的样品，进行氨基酸分析，测定其中各氨基酸的含量。
抗氧化活性测定
利用DPPH自由基法测定抗氧化肽的清除自由基能力。
稳定性测试
分别将抗氧化肽样品置于不同温度（20℃、30℃、40℃）、湿度（30%、50%、70%）和pH值（、、）下保存一定时间后，检测其抗氧化活性和氨基酸含量的变化情况。
三、结果与分析
马面鱼皮胶原蛋白的得率及质量分析
经过酸处理及乙醇沉淀、水洗、烘干等步骤后，，%。用氨基酸分析仪检测发现，胶原蛋白主要含有甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸等多种氨基酸，且含量较高，符合胶原蛋白的特征。
抗氧化肽的分离及纯化
经过胰蛋白酶酶解、酸沉淀、乙醇沉淀和凝胶层析后，得到纯度较高的抗氧化肽样品，经氨基酸分析得到具体的氨基酸组成，其中甘氨酸、酪氨酸、天冬氨酸等氨基酸含量较高。
抗氧化活性测定
以DPPH自由基为底物进行抗氧化活性测定，结果显示，马面鱼皮胶原抗氧化肽具有较强的抗氧化活性，，抗氧化能力强于传统抗氧化剂如维生素C、维生素E等。
稳定性测试
将抗氧化肽样品在不同条件下保存一定时间后，测定其抗氧化活性和氨基酸含量的变化情况。结果显示，马面鱼皮胶原抗氧化肽在不同温度、湿度和pH值下的稳定性较好，抗氧化活性和氨基酸含量的变化情况不大。
四、结论
本文成功地从马面鱼皮中提取得到胶原蛋白，并通过酶法分离得到具有较强抗氧化活性的抗氧化肽。本文对抗氧化肽的稳定性进行了研究，结果表明，马面鱼皮胶原抗氧化肽在不同条件下有较好的稳定性，具有很好的应用前景。