PCR实验室污染的应急处理方法.docx

该【PCR实验室污染的应急处理方法 】是由【xinyala】上传分享，文档一共【3】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【PCR实验室污染的应急处理方法 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。最新：PCR实验室污染的应急处理方法（全文）
PCR检测因其高灵敏度、快速、操作方便等优势已经被广泛应用，不过正 是由于它灵敏度极高，极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性， 因此所有的预防措施都会稍稍有所不同。
「易查不易察」，污染来的悄无声息，我们该如何应对。
那么，如何避免以及处理实验室污染，对PCR人来说是一门必修课。
一、PCR实验室污染分类
1、样本间交叉污染
主要是在采（取）样的过程中，由于取样工具之间的交叉造成污染；或者 在核酸提取的过程中，由于移液器、离心管等使用不当导致的污染。
2、PCR试剂污染
主要是在PCR组分试剂加样过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其 它试剂被核酸模板或阳性对照污染。
3、PCR扩增产物污染
这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大， 远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就 可形成假阳性。
还有一种容易被忽视的污染，是能造成PCR产物污染形式的气溶胶污染， 而气溶胶造成的污染是一个值得特别重视的问题。
4、克隆质粒污染
在实验操作中会经常用到阳性参考品，这些参考品大多数是由某些克隆质
粒制作而成的，质粒在单位容积内浓度高，不小心使用极易造成污染。
二、实验室污染处理方法
物料准备
(1)购买喷壶(能够喷出雾状水汽的即可)；
⑵购买市面上有效氯消毒片，根据要求配置不同浓度的消毒液，或者购买 成品次氯酸钠消毒液配制合适浓度消毒水；
⑶购买核酸气溶胶污染清除剂(DNA AWAYO原液 /MediClean⑧稀释 1 倍)；
⑷无纺布/无尘纸等。
应急处理方法
⑴清理废液缸并且对废液缸用有效氯含量为20mg/L消毒水浸泡消除 核酸污染；
⑵用有效氯含量为20mg/L消毒水对移液枪进行擦洗，关键部位为移 液枪前端易污染部位，清洁干净后用洁净水再擦拭一遍；
(3)将离心管架、扩增管架、扩增管架底板、吸嘴盒及其他相关物品用有效 氯含量为5mg/L的消毒水浸泡2小时后，用清水冲洗干净晾干后使用； ⑷对污染区域内的设备如扩增仪、全自动提取仪等，使用核酸气溶胶污染 清除剂进行反复处理；对生物安全柜等含有空气过滤系统的设备，需更换 过滤网；
⑸用有效氯含量为5mg/L的消毒液对整个实验室（地板、墙面、天花 板、门、窗户等地方）进行清洁，并且用用有效氯含量为10mg/L的消 毒水对实验室进行喷雾消毒（重点部位为操作区），有效降解空气中的气 溶胶与附着在实验台表面的核酸污染；同时加大通风量（内循环无用，尽 可能外循环）；
⑹待污染区域及设备器件清理完成后，常用设备和操作台面使用移动紫外 消毒车近距离辐照1小时；实验室内则使用室内紫外灯整晚辐照。
以上措施每日进行，直至污染消除；步骤（1）-（6必须坚持每天进行，确保 消除实验室污染；
消除污染判定标准
设计阴性对照组，根据阴性对照确认污染情况。可使用敞开后隔夜放置操 作区的阴性对照进行实验（在单独的实验室验证），若连续三天阴性对照没 有起跳，则说明污染得到控制，可恢复正常实验。
污染，是PCR实验室出现实验假阳性、结果不可信、研发不可靠的重要 推手。
在最初开展PCR实验室的时候，应最大程度的降低可能出现的PCR污染 或杜绝污染的出现，在实验室前期设计及日常实验室管理和操作中，就需 要进行合理的规划以及严格执行实验室SOP，把污染的可能性扼杀在摇篮 中。