山药块茎多糖的分离纯化及体外抗氧化性研究.docx

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引言：
山药（Dioscorea opposite Thunb.）是一种高蛋白、低脂肪、高营养价值的主食作物，中药材和保健食品原料。随着近年来人们对于保健品需求的增加，山药的生产规模和利用价值逐年扩大，其中山药多糖作为一种天然营养物质，其生物活性效应多种多样且广泛存在于生物体内，如抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、抗糖尿病等。因此，本文旨在探究山药多糖的分离、纯化及其体外抗氧化性能研究。
材料与方法：
1、实验材料
本实验选用新鲜山药（Dioscorea opposite Thunb.）块茎作为原料，采集自当地的农村地区，并于当天进行处理和分离。
2、提取山药多糖
将山药块茎切成小块，加入1000 mL纯净水中进行水浸提取，浸提时间为120min，提取温度为100℃，第一次提取后加入2000mL水再次进行提取，提取温度为100℃，提取时间为100min,合并两次提取的抽滤液，将滤液经过梯度乙醇沉淀制得山药多糖，纯化后得到山药多糖固体。
3、分离纯化
将得到山药多糖固体加入10kDa膜分离装置中进行膜分离，使用纯水进行清洗贮存，收到纯化的山药多糖样品。
4、体外抗氧化性能测定
添加不同剂量的山药多糖溶液，加入H2O2，计算H2O2分解率；添加不同铁离子浓度下的山药多糖溶液，分别记录样品的吸光度值。使用DPPH自由基清除实验、铁离子还原能力实验、羟自由基清除实验测试山药多糖的抗氧化性能。
结果与讨论

纯化的数据显示在300Da至10kDa（MWCO）的截止速率内，山药多糖峰明显呈现在约1kDa左右，随着时间的推移，山药多糖浓度逐渐降低。随后将山药多糖样品进行纯化，滤液收集后使用梯度乙醇沉淀，获得山药多糖固体样品，再次进行膜分离，通过纯水清洗、贮存后即获得高纯度的山药多糖样品。

自由基清除实验
使用DPPH自由基清除实验，结果显示山药多糖具有明显的清除DPPH自由基的能力，。

在铁离子还原能力实验中，我们发现山药多糖的抗氧化性能随其浓度的升高而明显提高。，。

使用羟自由基清除实验，结果显示山药多糖具有显著的羟自由基清除能力，随着溶液浓度的升高，其清除能力也随之增强。
结论：
山药多糖可通过水提取和梯度乙醇沉淀的方法进行提取分离，分离纯化后得到高纯度的山药多糖样品。在体外实验中，山药多糖表现出了良好的抗氧化性能，能够清除自由基，还原铁离子和清除羟自由基。因此，山药多糖有望成为一种天然的抗氧化剂，并有着广泛的应用前景和价值。