细胞培养的基本方法.ppt

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预防污染是无菌操作的关键。
掌握细胞培养中无菌操作技术及操作过程中需要注意哪些问题；
重点和难点：
教学目的和要求：2学时
第一节 无菌操作技术
组织培养中最重要的，也是最基本的要求就是各项操作均应从无毒害、无污染的培养环境来考虑。培养基、器皿材料、接种工具、操作环境、培养室和超净工作台等各个环节都应注意。
实验器具等的洗涤和材料的准备
培养玻璃器具的洗涤是非常重要的。用完后应洗净，再用蒸馏水冲一遍，烘干；
用合适的方法灭菌。
01
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培养室和超净台的消毒
无菌范畴
灭菌工作是极其重要的。对于初学者来说，首先应建立有菌和无菌的概念。
有菌的范畴：凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都是有菌的。如植物表面、超净工作台的台面，未处理的工具、手等。
物理或化学处理的物体（工具、器皿、培养基等） ；
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健康的动植物不与外部表面接触的组织内部可能是无菌的（有时也有内生菌，但不会影响培养，也不会污染）。
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无菌的范畴：
无菌操作室，工作前后室内清扫、拖地，以防菌在空气中流动，特别真菌孢子。使用前，室内及超净工作台紫外灯杀菌30分钟，超净工作台酒精（75%）杀菌，工作中一直吹风。
工作服、帽子、口罩；
洗手
三、洗手和着装
无菌操作
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点燃酒精灯，所有操作均在火焰近处并经过烧灼进行；
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冷却后才能使用；
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操作时，打开试管盖，要进行烧灼灭菌，但是时间要短。在火焰上烧瓶口。保证容器倾斜。
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进行操作时动作要准确敏捷，但是不宜太快，防止空气流动，增加污染的机会；
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超净工作台上的器具和用品要摆放合理；
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操作时器具不能触及瓶口以防止污染；
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不要说话
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