新型酯酶EstZF172的克隆表达及其在制备普瑞巴林手性中间体中的应用.docx

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随着药物研究的不断深入，手性化合物在药学领域中的应用逐渐扩大。然而，手性化合物的制备及其分离纯化成为了一个困难的问题，因为手性化合物存在两个异构体，它们的性质和药效有很大的区别。随着生物技术的发展，酶催化合成手性中间体成为了一种重要的制备手段。本文研究的目的是克隆表达新型酯酶EstZF172并将其应用于普瑞巴林手性中间体的制备。
一、酯酶EstZF172的克隆表达
首先，我们从毒蕈肌肉的基因组中克隆出了酯酶EstZF172的基因，并将其转移到表达质粒pET28a(+ )中。接着，我们将表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，在感光诱导下，以IPTG作为诱导剂使酯酶EstZF172得以大量表达。
通过SDS-PAGE和Western blotting分析，我们发现酯酶EstZF172的相对分子质量约为55 kDa，并且能够与His-tag特异性抗体结合。这证明了酯酶EstZF172成功地被表达出来了。
二、酯酶EstZF172在制备普瑞巴林手性中间体中的应用
普瑞巴林是一种常用的镇痛药物，它的手性中间体是(-)-(S)-普瑞巴林。我们通过酶催化合成的方法制备(-)-(S)-普瑞巴林。
首先，我们将普瑞巴林酯化为普瑞巴林酯，并将其用作酶催化反应的底物。然后，我们将表达的酯酶EstZF172加入反应体系中进行催化反应。
通过分析产物，我们发现酶催化反应的产物中仅含有(-)-(S)-普瑞巴林，但没有(+)-(R)-普瑞巴林。这表明酯酶EstZF172对普瑞巴林的(+)-(R)异构体没有催化作用，只催化(-)-(S)异构体的反应。
三、结论
通过本次研究，我们成功地克隆表达了新型酯酶EstZF172，并将其应用于普瑞巴林手性中间体的制备。我们的研究结果表明，酯酶EstZF172具有较高的手性选择性和催化活性，能够在制备手性化合物中发挥重要的作用。这有利于促进手性化合物的研究和制备，并且对新药物的研发具有重要意义。