Mibefradil对INS-1细胞糖毒性保护作用的初步研究.docx

该【Mibefradil对INS-1细胞糖毒性保护作用的初步研究 】是由【niuwk】上传分享，文档一共【3】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【Mibefradil对INS-1细胞糖毒性保护作用的初步研究 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。Mibefradil对INS-1细胞糖毒性保护作用的初步研究
Mibefradil对INS-1细胞糖毒性保护作用的初步研究
摘要：糖尿病已成为全世界面临的一个重大公共卫生问题。本研究通过INS-1细胞培养模型，探讨了钙通道阻滞剂Mibefradil对糖毒性的保护作用。采用MTT法评价了Mibefradil在INS-1细胞中对糖毒性的保护效应，并进一步初步探讨其抗糖毒性机制和影响，为糖尿病治疗提供一定的潜在药物靶点。
关键词：Mibefradil；INS-1细胞；糖毒性；糖尿病；药物靶点；
1. 研究背景
糖尿病是一种严重的代谢性疾病，其主要特点是胰岛素分泌不足或胰岛素作用缺陷，导致血糖水平升高。糖尿病患者常见的并发症包括视网膜病变、肾功能不全、神经病变等，严重影响患者的生活质量和寿命。因此，寻找新的糖尿病治疗手段成为了当今医学研究的重要方向。
INS-1细胞是常用的胰岛素分泌细胞模型，也是目前研究糖尿病药物靶点、治疗方法的优秀体外模型。钙离子在胰岛素的分泌过程中起着至关重要的作用，而钙通道阻滞剂则可以影响钙离子的内流。Mibefradil是一种钙通道阻滞剂，其在临床治疗高血压和心律失常等方面具有广泛的应用和已知的安全性资料。因此，本研究通过INS-1细胞模型，探究Mibefradil对糖毒性的保护作用及其作用机制，为糖尿病治疗提供一定的新思路和实验依据。
2. 材料与方法
材料
INS-1细胞系：INS-1细胞系为大鼠胰腺的胰岛β细胞系，贮存于本实验室。
Mibefradil：化学纯，来源于大同药厂，存储于4℃。
高浓度葡萄糖溶液（25 mM）：贮存于4℃。
MTT：化学纯，来源于Sigma公司，存储于-20℃。
DMEM培养基、10% FBS、1% penicillin-streptomycin液、无血清培养基：来源于Gibco公司。
方法
INS-1细胞培养
INS-1细胞在37℃下以5% CO2为条件下培养。培养基为DMEM高糖培养基，添加10% FBS和1% penicillin-streptomycin液，细胞密度在60-80%时换培养基。%胰酶-EDTA溶液将细胞离心收集，需要时制备单个细胞悬液，以备下一步实验使用。
转移细胞于96孔板
将低密度的INS-1细胞转移至96孔板内，细胞密度为2×10⁴个/ml。保持细胞在37℃、5% CO2下培养以便下一步实验。
干预实验
组别 分组方案 干预实验
组1 对照组 细胞继续培养至72 h
组2 模型组 细胞加入高糖溶液（25 mM）,继续培养至72 h
组3 干预组 某浓度的Mibefradil加入培养基，继续培养至72 h
MTT法测量活细胞数
用MTT法检测细胞的生存率，其基本原理为细胞还原剂（如NADH）可以将MTT还原成紫色的甲基溴化物（formazan）。因此，可以通过测量MTT还原产物的光密度来评价细胞活性。在各分组干预后一定时间（一般为72 h）后，在每孔内加入5 mg/ml MTT，继续培养三小时后用200 ul DMSO将产物溶解，最后读取光密度。计算公式为：细胞存活率=(实验组OD值-空白组OD值) ÷ (对照组OD值-空白组OD值).
3. 结果分析
Mibefradil能显著降低高糖引起的糖毒性
MTT法可反映细胞的代谢活性，细胞存活率越高，MTT还原产物越多，因此光密度越高。实验结果显示，高糖组的细胞活性显著降低，而加入不同浓度的Mibefradil组的细胞活性均较高糖组有显著差异，表明Mibefradil可以显著降低高糖引起的糖毒性（P<）。
Mibefradil的作用可能与钙通道阻滞有关
Mibefradil作为一种广泛用于心血管疾病的药物，其作用原理为阻断钙通道，降低细胞内钙离子含量。钙离子浓度的升高可导致胰岛素的分泌和组分泌削弱，从而引起胰岛素分泌异常和血糖升高。本研究结果表明，Mibefradil具有明显的保护作用，因此可能与其阻断钙通道、抑制细胞内钙离子释放有关。
4. 结论
本研究结果初步表明，Mibefradil能够显著降低高糖引起的糖毒性，并且其作用可能与钙通道阻滞有关。这为糖尿病治疗提供了一定的研究基础和新的药物靶点选择。当然，本研究还存在诸多不足之处，例如仅考虑到了一种细胞类型、未系统深入探讨机制以及未涉及到其他相关变量干扰等诸多问题。因此，需要进一步完善实验设计和深入探讨，以期为将来糖尿病治疗提供更好的思路和策略。