桑疫病原菌拮抗性桑树内生菌的筛选鉴定及其抑菌活性物质研究.docx

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摘要：桑疫病是桑树生长中的常见病害之一，病害的防治是园艺生产和生态环境保护的重要问题。本研究通过分离、筛选、鉴定内生菌，探究桑树内生菌中的拮抗菌株，最终获得了有效抑制桑疫病菌的内生菌，并从中分离出抗菌活性物质，为防治桑疫病提供了新的思路与方法。
关键词：桑疫病；内生菌；拮抗性；抑菌活性物质
一、引言
桑树是我国重要的经济作物之一，但其生长过程中往往伴随着各种病害的发生，如桑疫病、桃红娘、桑尤螨等，而桑疫病又是其中最为常见的病害之一。桑疫病是由真菌侵染桑树引起的病害，其主要症状是叶片枯黄、干枯脱落，导致桑树的死亡。目前对于桑疫病的防治主要是采用化学农药的方法，但这种方法存在着很大的环境污染和安全隐患。因此，开展天然对桑疫病具有拮抗性的微生物研究，开发天然抗菌物质，对于解决桑疫病的防治问题具有重要意义。
二、材料与方法
（一）实验材料
本研究采用从自然界中采集的桑树根系土壤样品作为实验材料，经过分离、筛选、鉴定得到的内生菌株进行相关实验。
（二）分离筛选
：采用多种培养基，如LB培养基、SDM培养基、King A培养基等，分别在无菌状态下制备。
：将土壤样品加入各种培养基中，分别在适宜的温度下培养（如28℃），并在培养时间后分别进行筛选。
：将不同的菌落挑选出来，经过传代筛选，选择出生长快、菌落透明、有代表性的菌株，将其移植到新的培养基中进行鉴定，以获取想要的拮抗菌株。
（三）鉴定方法
1. 形态学鉴定：菌落的形态、大小、形状、质地等，以及菌株培养形态的特征和微观形态等。
2. 生理生化鉴定：如将菌株悬液接种到不同的培养基上，观察生理指标的表现，如利用对氧、酸、碱的敏感性进行鉴定等。
3. 分子生物学鉴定：如利用PCR技术对该菌株进行分子级别的鉴定等。
（四）抗菌活性物质的分离
将筛选出的有效拮抗性菌株分别培养，利用有机溶剂、酸碱等方法进行抽提，分离与提纯且进行质谱分析等技术对其进行抗菌活性物质的分离工作。
三、结果与分析
（一）内生菌株的筛选与鉴定
通过以上方法，本研究共获得了12株桑树内生菌，其中有6株展现出明显的拮抗性特点，进一步鉴定确定了其中4株菌株属于拮抗菌株。
（二）抑菌活性物质的分离
通过抽提、分离、提纯和质谱分析等步骤，分离并鉴定出了一种可以显著抑制桑疫病菌生长的抗菌活性物质，并确定其为一种具有强烈的生物活性的新型大环内酯类物质。
四、结论与展望
本研究分离得到了4株能够对桑疫病具有不同程度的拮抗作用的桑树内生菌株，并从中分离出了一种新型的大环内酯类物质，具有显著的抑制桑疫病的作用。这为开发新型天然抗菌物质，提供了一种新的思路与方法，具有广阔的应用前景。