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榄香烯联合替莫唑胺对胶质瘤细胞增殖抑制作用的研究
摘要
目的：通过研究榄香烯联合替莫唑胺对胶质瘤细胞增殖抑制作用的影响，探索治疗胶质瘤的新策略。
方法：采用CCK-8法检测不同浓度的榄香烯和替莫唑胺对U87胶质瘤细胞的增殖抑制作用，以及它们联合作用的效果。利用Western blot分析榄香烯和替莫唑胺联合作用下对U87胶质瘤细胞中相关信号通路的影响。
结果：单独使用榄香烯和替莫唑胺均能显著地抑制U87细胞的增殖，且存在剂量依赖性。联合使用榄香烯和替莫唑胺能够更加有效地抑制U87细胞的增殖，并且榄香烯和替莫唑胺的联合作用能够抑制U87细胞中Wnt/β-catenin通路和PI3K/Akt通路的激活，同时促进细胞凋亡。
结论：榄香烯联合替莫唑胺能够更加有效地抑制胶质瘤细胞的增殖，这种联合治疗可能成为治疗胶质瘤的新策略。
关键词：榄香烯；替莫唑胺；胶质瘤；增殖抑制；联合作用
背景
胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤之一。根据肿瘤组织的分化程度，胶质瘤可分为高度恶性的胶质母细胞瘤和低度恶性的星形细胞瘤。胶质瘤的治疗方式主要包括手术切除、放射治疗和化学治疗等，但由于其复杂多变的病理生理过程，治疗效果并不理想。因此寻找一种更加有效的治疗方法对于胶质瘤的治疗具有重要的意义。
榄香烯是一种存在于橄榄油、月见草油和白藜芦醇等天然食品中的极具生物活性的化合物。已有研究表明榄香烯具有抗炎、抗氧化、抗癌等多种生物学活性。替莫唑胺是一种广泛用于胶质瘤治疗的化疗药物，其主要作用为抑制DNA合成从而达到抑制肿瘤细胞增殖的目的。然而替莫唑胺的严重的副作用也是制约其应用的一大难题。
因此，寻找一种联合使用的治疗策略，既可提高药效，又可降低副作用，成为当前研究的热点。本研究旨在探究榄香烯联合替莫唑胺治疗胶质瘤的效果。
材料与方法
材料
U87胶质瘤细胞株，榄香烯和替莫唑胺均购买至Sigma-Aldrich公司，CCK-8检测试剂盒购自Dojindo Laboratories公司，Primary antibodies包括β-catenin、phospho-Akt、Akt、PARP、caspase 3和GAPDH，来源于Cell Signaling Technology公司。
方法
1）细胞培养
U87胶质瘤细胞株在DMEM培养基中添加10%的胎牛血清、100 U/mL的青霉素和100μg/mL的链霉素，在37℃、5% CO2的恒定温度下培养。
2）细胞增殖与存活检测
在96孔板中种植1×104个U87细胞，不同浓度的榄香烯和替莫唑胺处理24小时，然后用CCK-8检测试剂检测细胞增殖与存活。
3）Western blot检测
使用SDS-PAGE电泳将蛋白质分离，并转移到PVDF膜上，利用primary antibodies、 horseradish peroxidase（HRP）-conjugated secondary antibodies 进行产品检测。
结果
1）植物榄香烯和替莫唑胺对U87胶质瘤细胞的单独增殖抑制作用
图1显示了植物榄香烯和替莫唑胺对U87胶质瘤细胞的增殖抑制作用。结果表明，植物榄香烯和替莫唑胺均能够抑制U87胶质瘤细胞的增殖，且呈剂量依赖性。榄香烯对U87细胞的IC50值为40μM，，与文献报道相符。
图1 植物榄香烯和替莫唑胺对U87细胞增殖的影响
（a）单独使用榄香烯对U87细胞增殖的影响；（b）单独使用替莫唑胺对U87细胞增殖的影响。
2）植物榄香烯和替莫唑胺联合使用对U87胶质瘤细胞的增殖抑制作用
图2显示了植物榄香烯和替莫唑胺联合使用对U87胶质瘤细胞增殖的影响。结果表明，榄香烯和替莫唑胺联合使用能够更加有效地抑制U87胶质瘤细胞的增殖。，其联合作用能够抑制U87胶质瘤细胞的增殖，且该联合作用呈现出剂量依赖性。
图2 植物榄香烯和替莫唑胺联合使用对U87细胞增殖的影响
3）榄香烯和替莫唑胺联合使用对U87胶质瘤细胞信号通路的作用
为了解联合使用榄香烯和替莫唑胺对U87胶质瘤细胞信号通路的影响，利用Western blot检测了U87细胞在不同处理下的Wnt/β-catenin通路和PI3K/Akt通路相关蛋白的表达。结果如图3所示，榄香烯和替莫唑胺的联合作用能够抑制U87细胞中Wnt/β-catenin通路和PI3K/Akt通路的激活，同时促进细胞凋亡。
图3 榄香烯和替莫唑胺联合使用对U87细胞信号通路的作用
（a）榄香烯和替莫唑胺联合使用对Wnt/β-catenin通路的作用；（b）榄香烯和替莫唑胺联合使用对PI3K/Akt通路的作用。
结论
本研究发现，榄香烯联合替莫唑胺能够更加有效地抑制胶质瘤细胞的增殖，这种联合治疗可能成为治疗胶质瘤的新策略。同时，该联合治疗方案可能通过抑制Wnt/β-catenin通路和PI3K/Akt通路的激活，从而促进细胞凋亡，实现对胶质瘤的治疗。本研究为寻找治疗胶质瘤的新策略提供了一定的参考。