高考生物考点一遍过考点微生物的培养和用(含解析).docx

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培育基
概念：人们依据微生物对养分物质的不同需求，配制出供其生长生殖 的养分基质。
养分组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特别养分物质的要求。
种类：依据物理性质可分为液体培育基和固体培育基。2．无菌技术
含义：指在培育微生物的操作中，全部防止杂菌污染的方法。
关键：防止外来杂菌的入侵。
不同对象的无菌操作方法(连线) 3．大肠杆菌的纯化培育
制备牛肉膏蛋白胨固体培育基
①操作步骤
→→→→
②倒平板的方法及留意事项 a．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。b．甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。
c．丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进展。
纯化大肠杆菌的方法
①纯化培育原理：想方设法在培育基上得到由一个细菌生殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。
②纯化大肠杆菌的关键步骤是接种。
③常用的微生物接种方法有两种
平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培育基外表连续划线的操作 ，将聚拢的菌种逐步稀释分散到培育基的外表。
稀释涂布平板法：是将菌液进展一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的外表，进展培育。
系列稀释操作(如下图)： 涂布平板操作(如下图)：
菌种的保存方法
①对于频繁使用的菌种，可以承受临时保藏的方法。
②对于需要长期保存的菌种，可以承受甘油管藏的方法。4．土壤中分解尿素的细菌的分别与计数
分别原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是由于它们能合成脲酶， 这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。
统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。
试验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培育与观看→细菌的计数 。 5．分解纤维素的微生物的分别
纤维素酶
①组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C
1
酶、C 酶和葡萄糖苷酶。
X
②作用
纤维素C1 酶纤维二糖葡萄糖
纤维素分解菌的筛选
①原理
②筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透亮圈来筛选纤维素分解菌。
③培育基：以纤维素为唯一碳源的选择培育基。
④试验流程
考向一 培育基及其制备方法分析1．下表为某培育基的配方，以下表达正确的选项是
B．该培育基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C．该培育基缺少供给生长因子的物质
D．该培育基调整适宜的pH 后就可以接种使用
【参考答案】B 解题必备
培育基的配制原则
目的要明确：配制时应依据微生物的种类、培育目的等确定配制的培 养基种类。
养分要协调：留意各种养分物质的浓度和比例。
〔3〕pH 要适宜：细菌为 ～，放线菌为 ～，真菌为 ～， 培育不同微生物所需pH 不同。
微生物对主要养分物质的需求特点
不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培育基中养分物质的需求也不同。
〔1〕自养型微生物所需的主要养分物质是无机盐，碳源可来自大气中的 CO ，
2
氮源可由含氮无机盐供给。
成分
蛋白胨
葡萄糖
K HPO
2 4
伊红
美蓝
蒸馏水
〔2〕异养型微生物所需的养分物质主要是有机物，即碳源必需由含碳有机物
含量
10 g
10 g
2 g
g
g
1 000 mL
A．从物理性质看该培育基属于液体培育基，从用途看该培育基属于选择培育基
供给，氮源也主要是由有机物供给，局部异养型微生物也可以利用无机
氮源。
如下表所示为培育某种微生物的培育基的配方，请答复：
成分
NaNO
3
K HPO
2 4
MgSO ·7H O
FeSO
2
4
(CH O)
2
琼脂
4
H O
2
含量
3 g
g
g
g
30 g
10 g
1 000 mL
依物理性质，该培育基属于 培育基。
依据培育基原料，所培育微生物的同化作用类型是 。
该培育基中的碳源是 。
不管何种培育基，在配好之后倒平板之前都要先进展的 ；倒平板时，一般需冷却至 左右，并在 操作。
假设用该培育基培育分解尿素的细菌，应除去物质 ，并参加物质
【答案】〔1〕固体
〔2〕异养型
〔3〕(CH O)
2
灭菌 50 ℃ 酒精灯四周
NaNO 尿素
3
考向二 无菌技术的操作
无菌技术包括以下几个方面的表达，其中正确的选项是 A．紫外线照耀前，适量喷洒石碳酸等消毒液，可以加强消毒效果 B．高压灭菌加热完毕时，翻开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖 C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落 D．在微生物接种的试验中，用95%酒精对试验者的双手和超净工作台进展消
毒
【参考答案】A
【试题解析】用紫外线照耀 30 min，可以杀死物体外表或空气中的微生物， 在照耀前，适量喷洒石碳酸等消毒液，可以加强消毒效果，A 正确；高压灭菌加热完毕时，待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能翻开放气阀使压力表指针回到零，B 错误；为了防止污染，接种环经火焰灭菌、冷却后才可以快速挑取菌落，C 错误；在微生物接种的试验中，一般用 75%酒精对试验
者的双手进展消毒，用紫外线照耀 30 min 对超净工作台进展灭菌，D 错误。解题技巧
工程
条件
结果
常用方法
应用范围
煮沸消毒法
日常用品
较为温顺的 仅杀死物体外表或
巴氏消毒法
不耐高温的液体
消毒
物理或化学 内部的局部对人体
化学药剂消 用酒精擦拭双手，用
方法
有害的微生物
毒法
氯气消毒水源
灼烧灭菌法
接种工具
杀死物体内外全部
猛烈的理化
干热灭菌法 玻璃器皿、金属工具
灭菌 的微生物，包括芽
因素 高压蒸汽灭
孢和孢子 培育基及容器的灭菌菌法
消毒和灭菌的辨析
细菌培育过程中分别承受了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理， 这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌
A．接种环、手、培育基B．高压锅、手、接种环
C．培育基、手、接种环D．接种环、手、高压锅
【答案】C
考向三 大肠杆菌的纯化方法及过程分析5．以下图中甲是稀释涂布平板法中的局部操作，乙是平板划线法的操作结果。
以下表达中错误的选项是 A．甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液
B．对于浓度较高的菌液，如甲中的稀释倍数仅为 102，则所得的菌落不肯定是由单一的细胞或孢子生殖而成
C．乙培育皿中所得的菌落都符合要求 D．乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端
【参考答案】C 归纳整合
两种纯化细菌方法的比较
工程
优点
缺点
适用范围
可以观看菌落特征，
平板划线法
不能计数
适用于好氧菌
对混合菌进展分别
吸取量较少，较
可以计数，可以观看 麻烦，平板不干 适用于厌氧菌和兼性
稀释涂布平板法
菌落特征
燥效果不好，容 厌氧菌
易集中
以下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请答复相关问题。
图甲是利用 法进展微生物接种，图乙是利用
法进展微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是 和 ；对这两种接种工具进展灭菌和消毒的方法依次是 和酒精消毒。
接种操作为什么肯定要在火焰四周进展？
。
接种后，在固体培育基上培育细菌时为什么进展倒置培育？
。
如图是承受上述接种方法接种后培育的效果图解，其接种方法是
(填“图甲”或“图乙”)。
【答案】〔1〕平板划线 稀释涂布平板 接种环 涂布器 灼烧灭菌
火焰四周存在着无菌区域
避开培育过程产生的水分影响微生物的生长
图乙
考向四 选择培育基成分及配制方法的分析
选择培育基是依据某一种或某一类微生物的特别养分要求或对一些物理、 化学抗性而设计的培育基。利用这种培育基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分别出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培育基分别为
伊红美蓝培育基、含青霉素培育基B．含青霉素培育基、含氨的无机培育基C．含氨的无机培育基、含青霉素培育基D．含青霉素培育基、伊红美蓝培育基
【参考答案】B 技法提炼
选择培育基的制作方法
在培育基全部养分成分具备的前提下，参加物质：依据某些微生物对某 些物质的抗性，在培育基中参加某些物质，以抑制不需要的微生物，促进所需要的微生物生长，如培育基中参加高浓度食盐时可抑制多种细菌的 生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可将该菌分别出来；而在培育基中参加青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分别得到酵母菌和霉菌。
通过转变培育基的养分成分到达分别微生物的目的：培育基中缺乏氮源时 ，可分别自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培 养基中假设缺乏有机碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气 中
的CO 制造有机物生存。
2
利用培育基的特定化学成分分别特定微生物：如当石油是唯一碳源时， 可抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，从而
分别出能消退石油污染的微生物。
通过某些特别环境分别微生物：如在高盐环境中可分别耐盐菌，其他菌 在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分别得到耐高温的微 生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。
杀虫脒，又名氯苯脒，是一种有机氮农药，具有高效广谱杀虫杀螨的作用， 但长期使用简洁导致土壤污染，为探究能降解杀虫脒的细菌进展了以下实 验。
微生物生长生殖所需的主要养分物质有碳源、 、水、无机盐四类，该试验所用的培育基只能以杀虫脒作为唯一氮源，其缘由是
，从功能上讲，该培育基属于 培育基。
微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法， 这两种方法在功能上的区分是 ，此外， 也是测定微生物数量的常用方法。
为了筛选出高效菌株，可比较单菌落四周分解圈的大小，分解圈大说 明该菌株的降解力量 。
通常状况下，在微生物培育过程中试验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和 。培育基一般不使用干热灭菌的缘由是
。
【答案】〔1〕氮源 只有能利用杀虫脒的微生物才能正常生长和生殖选择
稀释涂布平板法可以用于统计样品中活菌数目 显微镜直接计数
强
高压蒸汽灭菌 湿度低会破坏培育基中的养分成分考向五 土壤中分解尿素的细菌的分别与计数
以下有关“土壤中分解尿素的细菌的分别与计数试验”的表达，不正确的 是 A．用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培育基培育尿素分解菌，指示剂不变红
分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生氨和二氧化碳 C．统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在 30~300 的平板进展计数D．将试验组和比照组平板倒置，30~35 ℃恒温培育 24~48 小时
【参考答案】A
【试题解析】用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培育基培育尿素分解菌， 尿素分解菌将尿素分解为
的重复原则，易受到偶发因素的影响。
〔2〕得到 3 个或 3 个以上菌落数在 30～300 的平板，也不肯定正确，这可能有两种状况：
①不同平板间差异较大，如得到 3 个平板，菌落数分别为 230、34、240， 虽然菌落数均在“30～300”之间，这也是不正确的，由于“34”与“230”“240”差异太大，应重试验找出缘由。
②不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。
可见，并不是只要得到 3 个“菌落数在 30～300 的平板”即可，而应当是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在 30～300 的平板”且无较大差异，说明试验操作合格，才能依据计算公式进展计算。
下表是某同学列出的分别土壤中微生物培育基的配方，据此答复以下问题：
培育基配方
KH PO g
2 4
Na HPO
2 4
 g
易错警示
稀释涂布平板法计数微生物的留意问题
用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在 30～300 的平板进展计数。解题时易消灭以下误会：
MgSO ·7H O g
4 2
葡萄糖 g
尿素 g
琼脂 g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL
〔1〕从作用上看，该培育基属于 培育基，供给氮源的物质是
只得到 1 个菌落数在 30～300 的平板是错误的。错误的缘由是不符合试验 ，细菌能利用该氮源是由于体内能合成 酶。
在对分别的能分解尿素的细菌进展鉴定时，还需在培育基中参加
指示剂，假设指示剂变 ，说明有目的菌株存在。
为了测定微生物的数量，接种时应承受 法，某同学在 4 个培育基上分别接种稀释倍数为 106 的土壤样液 mL，培育后菌落数分别为 180、155、176、129 个，则每毫升原土壤样液中上述微生物的数量为 ，测定的活菌数比实际活菌数 (填“低”“高”或“根本全都”)。
【答案】〔1〕选择 尿素 脲(催化尿素分解的)
酚红 红
稀释涂布平板 ×109 低考向六 分解纤维素的微生物的分别
解题技巧
工程
土壤中分解尿素的细菌的分别
分解纤维素的微生物的分别
使用以尿素为唯一氮源的选择培
利用富含纤维素的选择培育基进
方法
养基进展培育
行培育
土壤中不能分解尿素的微生物因
由于培育基中含有丰富的纤维素，
缺乏脲酶而不能正常生长，能够分
原理
因此能够分解纤维素的微生物具
解尿素的微生物能利用尿素为氮
有更多的生存时机而大量生殖
源正常生长，从而起到选择作用
特有
纤维素
代表
CO(NH ) ＋H OCO ＋2NH
2 2 2 2 3
纤维二糖葡萄糖
过程
两种微生物筛选方法的比较
12．植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。答复以下相关问题：
〔1〕分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由 3 种组分形成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将 分解成
分别纤维素分解菌的试验过程中操作有误的是 A．经选择培育后即可将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培育基上B．选择培育这一步可省略，但纤维素分解菌少 C．经稀释培育后，用刚果红染色
D．此试验中需设置比照组
【参考答案】A
【试题解析】经选择培育后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培育基上；富集培育可省略；经稀释培育后，用刚果红染色；设置比照能证明经富集培育得到了欲分别的微生物。
 。
在含纤维素的培育基中参加刚果红(CR)染料时，CR 可与纤维素形成
色复合物。用含有 CR 的该种培育基培育纤维素分解菌时，培育基上会消灭以该菌的菌落为中心的 。
为从富含纤维素分解菌的土壤中分别获得纤维素分解菌的单菌落并加以鉴定，某同学设计了甲、乙两种培育基：
酵母膏
无机盐
淀粉
纤维素粉
琼脂
CR 溶液
水
培育基甲
＋
＋
－
＋
－
＋
＋
培育基乙
＋
＋
＋
－
＋
＋
＋
注：“＋”表示“有”，“－”表示“无”。
据表推断，培育基甲 (填“能”或“不能”)用于分别纤维素分解菌，缘由是 ；培育基乙 (填“能”或“不能”)用于鉴定纤维素分解菌，缘由是
。
【答案】〔1〕纤维二糖 葡萄糖
红 透亮圈
不能 液体培育基不能分别单菌落 不能 培育基中没有纤维素(不能形成CR－纤维素红色复合物)
【解析】〔1〕葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖。〔2〕刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，消灭以纤维素分解菌为中心的透亮圈，可以通过是否产生透亮圈来筛选纤维素分解菌。〔3〕纤维素分解菌分别和鉴别培育基属于固体培育基，而培育基 甲中没有琼脂，是液体培育基，要分别和鉴别纤维素分解菌，需要以纤维素为唯一碳源的培育基，培育基乙没有纤维素，不能形成CR－纤维素红色复 合物，无法鉴定纤维素分解菌。
以下有关微生物培育的表达，错误的选项是A．获得纯洁培育物的关键是防止杂菌污染
B．平板划线法和稀释涂布平板法都可对微生物进展计数C．培育基常用高压蒸汽灭菌法灭菌 D．倒置平板可防止培育皿盖上的冷凝水滴落，造成污染
用平板划线法或稀涂布平板法都可以纯化大肠杆菌，二者的共同点是A．都可以用固体培育基或液体培育基 B．都需要使用接种环进展接种 C．接种时都需要在酒精灯的火焰旁进展 D．都可以用来统计样品中的活菌数
在微生物培育的过程中，需要通过选择培育或鉴别培育的方法来筛选出目 标菌种，以下与之相关的表达中不正确的选项是 A．纤维素分解菌能够分解刚果红染料，从而使菌落四周消灭透亮圈 B．尿素分解菌能够将尿素分解为氨，从而使酚红指示剂变红 C．在培育基中参加抗生素能够筛选出具有相应抗性的菌株 D．在含有碳酸钙的培育基上生长的乳酸菌菌落四周会消灭“溶钙圈”
某争论小组从有机废水中分别微生物用于废水处理。以下表达正确的选项是A．培育基分装到培育皿后进展高压蒸汽灭菌 B．转换划线角度后需灼烧接种环再进展划线 C．接种后的培育皿须放在光照培育箱中培育 D．培育过程中每隔一周观看三次菌落生长
幽门螺杆菌〔能分解对热不稳定的尿素〕是急慢性胃炎和消化道溃疡的主 要致病因素。为从带菌者胃粘膜样本中分别出该细菌，相关试验步骤和方法不合理的是
配制培育基并灭菌后，需要参加无菌尿素B．应设置未接种的培育基，做为试验的比照C．统计样本中活菌数量时，可用划线法接种D．可利用酚红指示剂对培育的菌落进展鉴定
如图为分别和纯化分解甲醛细菌的试验过程，其中LB 培育基能使菌种成倍扩增，以下说法正确的选项是
需要对活性污泥作灭菌处理 B．②中 LB 培育基应以甲醛为唯一碳源C．目的菌种异化作用类型为厌氧型
D．经⑤处理后，应选择瓶中甲醛浓度最低的一组进一步纯化培育 7．如下图，自来水经滤膜过滤后，转移到牛肉膏蛋白胨培育基上，适宜条件
下培育 48 h，染色后统计变色菌落数目为 165 个。以下说法正确的选项是A．假设培育基含伊红—美蓝，大肠杆菌菌落呈蓝绿色 B．自来水中大肠杆菌浓度是 33 个·L-1，比真实值偏大C．为了提高准确度，需设重复试验，但不用空白比照 D．假设培育基菌落数目大于 300，可适当削减自来水量
以下图是争论人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的示意图，有关表达错 误的是
A．在配制步骤②、③的培育基时，应先调pH 值后高压蒸汽灭菌B．步骤③承受涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培育基中参加尿素 C．步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的力量 D．步骤③纯化分解尿素的原理是将聚拢的细菌分散，可以获得单细胞菌落
分别筛选降解纤维素力量强的微生物，对于解决秸秆等废弃物资源的再利 用和环境污染问题具有重要意义。争论人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐、硫酸盐、KCl、酵母膏以及水解酪素配制的培育基，成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物。请答复以下问题：
培育基中参加的化合物A 是 。本试验将样品稀释涂布到鉴别培育基之前要进展选择培育，目的是 。
为了筛选出能产生纤维素酶的微生物，向培育基中参加 溶液，等培育基上长出菌落后，能产生纤维素酶的菌落四周会消灭 。
为在培育基外表形成单个菌落，假设以接种环为工具，则用 进展接种。假设用稀释涂布平板法进展接种，在涂布平板时，滴加到培育基外表的菌悬液量不宜过多的缘由是 。
用三种菌株对秸秆进展处理，并在第 5 天和第 10 天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解状况进展了测定〔结果如图〕。
据图分析可知，三种菌株对 的降解作用最强。与第 5 天结果相比，
第 10 天秸秆各组分中 的降解率变化最大。10．聚对苯二甲酸乙二酯(PET)是塑料类水瓶的重要原料，科学家觉察了以PET
为碳源和能量来源的细菌，该觉察对PET 类材料的回收利用、环境治理意义重大。请答复以下问题：
试验小组欲从土壤中猎取PET 降解菌，需将土壤样品置于 为唯一碳源的培育基中进展选择培育，其目的是 。
该试验小组选取PET 浓度为 800 mg·L-1 的富集液进展系列稀释，分别
取 10-3、10-4 和 10-5 倍数的稀释液 mL 涂布于培育基上，每个稀释
是 ，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是
倍数涂布三个平板，各平板的菌落数分别为〔286、298、297)，(35、 。
32、31)，(36、7、2)，不适合用于计数的为 倍数的稀释液， 用另外两组稀释倍数的稀释液进展计数得到的细菌数不全都的缘由可能是 。
倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，目的是 。在倒平板的过程中，假设培育基溅在皿盖与皿底之间的部位，则这个平板不能用来培育大肠杆菌，缘由是 。用平板划线法纯化PET 降解菌的过程中，在其次次及其后的划线操作时，须从上一次划线的末端开头划线，缘由是 。
在保藏 PET 降解菌菌种时，可实行 的方法进展长期保存。11．〔2025·全国Ⅰ卷〕将马铃薯去皮切块，加水煮沸肯定时间，过滤得到马
铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中参加肯定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌， 得到 M 培育基。
答复以下问题：
〔1〕M 培育基假设用于真菌的筛选，则培育基中应参加链霉素以抑制 的生长，参加了链霉素的培育基属于 培育基。
〔4〕甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量， 在同一稀释倍数下得到以下结果：
甲同学涂布了 3 个平板，统计的偏落数分别是 110、140 和 149，取平均值 133；
乙同学涂布了 3 个平板，统计的菌落数分别是 27、169 和 176，取平均值 124。
有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其缘由是
。 12．〔2025·全国Ⅱ卷〕在生产、生活和科研实践中，常常通过消毒和灭菌来避开杂菌的污染。答复以下问题：
在试验室中，玻璃和金属材质的试验器具 〔填“可以”或“不行以”〕放入干热灭菌箱中进展干热灭菌。
牛奶的消毒常承受巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比 ，这两种方法的优点是 。
密闭空间内的空气可承受紫外线照耀消毒，其缘由是紫外线能
〔2〕M 培育基中的马铃薯浸出液为微生物生长供给了多种养分物质，养分 ，在照耀前，适量喷洒 ，可强化消毒效果。
物质类型除氮源外还有 〔答出两点即可〕。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有 〔答出两点即可〕。
假设在M 培育基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培育，平板上长出菌落后可通过参加显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。参加的显色剂
水厂供给的自来水通常是经过 〔填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”〕消毒的。
某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，假设压力到达设定要求，而锅内并没有到达相应温度，最可能的缘由是 。