生物学综合实验模块二省公开课一等奖全国示范课微课金奖PPT课件.pptx

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植物生理学大试验
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试验二 还原糖含量测定
目标与要求
经过本试验，掌握碱性铜试剂定量测定微量还原糖方法，了解测定原理，并测定苹果中还原糖含量。糖类是植物体内主要能源，其含量可高达植物干重80%以上。所以，在科学研究与生产实践中，常需进行糖定量测定。
原理
糖是多羟醛（或多羟酮）化合物，多糖和寡糖等都能够经酸或酶水解生成还原糖。还原糖是指糖分子中有自由醛基或半缩醛羟基或酮基糖，它们含有还原性质。还原糖在碱性溶液中，加热后能定量地将二价铜[Cu (OH)2]还原成一价铜（Cu2O），即形成砖红色氧化亚铜沉淀。糖本身则被氧化形成酸。氧化亚铜量能够用碘量法测定。
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原理
测定时所发生一系列反应以下：
2NaOH + CuSO4 → Na2SO4 + Cu (OH)2
Cu (OH)2 + 酒石酸钾钠 → 二价铜离子络合物+ H2O
还原糖 + 二价铜离子络合物 → 糖酸 + Cu2O
KIO3 + 5KI +3H2SO4 → 3I2 + 3K2SO4 + 3H2O
Cu2O + H2SO4 → Cu2SO4+H2O
Cu2SO4 + I2 + K2SO4 → 2CuSO4 + 2KI
2Na2S2O3+I2 → 2NaI + Na2S4O6
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材料及设备
一、材料
苹果。取若干苹果切开切碎，随机取材，2克/份，共3份。
二、仪器
大试管（25×250毫米） 吸量管
棕色试剂瓶 锥形瓶
玻璃搅棒 水浴锅
回流装置 50毫升酸式滴定管
容量瓶 细口试剂瓶
烧杯 恒温水浴
分析天平
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试剂
碱性铜试剂配制
称酒石酸钾钠6克，溶于约50毫升蒸馏水中；称无水
碳酸钠10克，研成细粉，溶于约100毫升热蒸馏水中；称
，溶于约100毫升水中，可加热促进溶
解。待全部溶解后，将上述三种溶液混合均匀。另外称
取结晶硫酸铜（CuSO4·5H2O），研成细粉，溶于
约50毫升蒸馏水中。完全溶解后，在搅拌下将它加入上
述混合液中。为预防沉淀可在沸水浴上加热10分钟。称
取碘酸钾（KIO3）（），草酸钾9
克，溶于约100毫升蒸馏水中，完全溶解后，加入到上述
混合液中，定容到500毫升。
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试剂
5%碘化钾（KI）溶液100毫升。
（Na2S2O3）

标准葡萄糖母液
6N硫酸溶液
8N盐酸溶液
1%淀粉溶液
80％乙醇
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试验步骤
一、标定硫代硫酸钠溶液浓度
取三个100毫升锥形瓶，
（KI）。
盐酸，此时反应以下：
K2Cr2O7 + 6KI + 14HCl → 8KCl + 2CrCl3 + 7H2O + 3I2
当碘化钾完全溶解后，立刻用待标定硫代硫酸钠溶液进行滴
定，此时需不时摇动锥形瓶。当溶液滴至微黄色时，加入1-2滴1%
淀粉溶液，继续滴定，至蓝色突然消失。统计下硫代硫酸钠用
量。，求出平均值。该溶液应每七天
标定一次。
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试验步骤
二、绘制葡萄糖标准曲线
用吸量管准确吸收标准葡萄糖母液（10毫克/5毫升），分别配制成每5毫升
, , , , ，用50毫升容量瓶配制。
用吸量管准确吸收各种浓度糖溶液5毫升（每种浓度做三份），放到大试
管内。取另一支吸量管，准确吸收5毫升碱性铜试剂，放到大试管内，空白用5
毫升蒸馏水代替糖溶液。混匀后，在沸水浴中加热15分钟，然后取出在冷水中
放3分钟，加热和冷却时，切勿摇动。
冷动后，用滴管沿壁加约1毫升5%碘化钾溶液（约20滴），再加入1毫升
6N硫酸，并摇动试管，待反应停顿后，立刻用标定好浓度硫代硫酸钠溶液
滴定，边滴边用特制玻棒搅动。当溶液褪至淡黄色时，加入2-3滴1%淀粉溶
液，使溶液呈蓝色。继续滴定，至蓝色突色消失，并在半分钟内不再变蓝。
统计硫代硫酸钠用量。三次滴定差值，。以空白滴定
值和糖溶液滴定值之差为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘成标准曲线。
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试验步骤
三、检验标准曲线
另取一个未知浓度葡萄糖溶液，按上述操作程序二
进行测定，从绘制标准曲线上查出糖含量，并与实
际值比较，求出百分误差。此微量定糖法准确度，所
-3毫克范围内，可允许绝对误差为
±，百分误差（相对误差）为±2%。从测得值
与实际值比较，求出百分误差：
绝对误差×100
百分误差（±%）= －－－－－－－－
实际值
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试验步骤
四、植物材料分析
随机取3份苹果，2克/份，每份用滤纸包好，分别放入100毫升
锥形瓶中。向每瓶内各加入20毫升80%乙醇溶液，塞上回流管，
在80℃恒温水浴上回流提取30分钟。仔细吸出上清液，分别过滤到
50毫升容量瓶内。残渣内再加入约10毫升80%乙醇，如上述方法再
回流提取20分钟。取下后，一并滤入同一个容量瓶内，重复2次。最
后分别定容至50毫升。置冰箱内保留。
取上述提取液5毫升，加入5毫升碱性铜试剂，放入大试管内，
按标准曲线绘制法，测定样品中还原糖含量。
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