核酸的生物学功能.ppt

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（一）重组DNA技术的基础
（二）重组DNA技术的基本操作过程
（三）重组DNA技术的应用
（一）重组DNA技术的基础
02
它是按生物科学规律，在体外人为的改造基因，最终往往使生物的遗传性状获得改变，故又称为“遗传工程” ，亦即“基因工程” 。
01
在体外，将一种外源DNA和载体DNA重新组合连接，形成杂交DNA，然后将其转入宿主细胞，最终使外源DNA在宿主细胞中随着宿主细胞的繁殖而增殖和表达,从而改变生物原有遗传性状的过程，称为重组DNA技术。
重组DNA技术的定义
重要的工具酶
载体

重要的工具酶
01
它能够识别、切割双链DNA分子中的特定
序列，这些特定序列多数为反向重复序列，
一般长度是4、5或6bp。
02
限制性内切酶
03
粘性末端
如 EcoR I:
5’ ---GAATTC
CTTAAG---3’
②平齐末端
如 HaeIII:
5’ ---GGCC
CCGG---3’
P GAATTCQ
P'CTTAAGQ'
XGAATTCY
X'CTTAAGY'
AATTCQ
PG
P'CTTAA
GQ'
XG
AATTCY
X'CTTAA
GY'
P'CTTAA
PG
AATTCY
GY'
X'CTTAA
XG
GQ'
AATTCQ
EcoR1限制性酶酶切
片段退火与DNA连接酶连接
目前使用的连接酶有两种：
大肠杆菌DNA连接酶 黏性末端连接；
T4 连接酶 黏性和平齐末端连接。
02
DNA连接酶
01
（2）载体
概 念
能将外源DNA带入宿主细胞，进行复制扩增或最终使外源基因得以表达的自主 DNA，称为载体（vector）。
分 类
① 克隆载体 用于基因的复制、扩增、测序等；
② 表达载体 用于目的基因的表达。
重组DNA技术的基本操作过程
目的基因的获得
选择和制备载体
将目的基因与载体进行切割连接
将重组体导入受体细胞
阳性克隆的筛选和鉴定
DNA重组体的扩增、表达等研究
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