蛋白质等电点的测定.ppt

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01
了解蛋白质的两性解离性质。
02
学习测定蛋白质等电点的方法。
主要内容
蛋白质的解离性质
蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下列平衡：
蛋白质的等电点
蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。
01
测其溶解度最低时的溶液pH值。
03
浊度、分光光度法
02
等电聚焦电泳测其净电荷为零时的PH
04
基于蛋白质与离子交换的作用
最常用的方法是：
测定溶解度最低时的溶液PH
实验原理：
借观察在不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。用醋酸与酷酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶液中)配制成各种不同pH值的缓冲液。向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。
器材：
水浴锅、温度计、200毫升锥形瓶、100毫升容量瓶、吸管、试管、试管架、乳钵
试剂：
(1)％酪蛋白醋酸钠溶液
(2)／升醋酸溶液
(3)／升醋酸溶液
(4)／升醋酸溶液
实验器材与试剂：
实验步骤：
(1) 取同样规格的试营4支，按下表颠序分别精确地加入各试剂，然后混匀。
试管号
蒸馏水（ml）
（ml）
（ml）
1M醋酸（ml）
1


—
—
2

—

—
3

—

—
4

—
—

向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1毫升，加一管，摇句一管。此时1、2、3、、、、。观察其混浊度。静置10分钟后，再观察其混浊度。最混浊的一管的pH即为酪蛋白的等电点。
二、等电聚焦电泳
原理：1）有一类两性电解质：它具有依次递变而又相差不大的等电点，在电场下形成递变而又连续的pH梯度，故在电泳介质中加入这种物质则能造成介质pH由酸到碱逐步变化。