结球白菜中抗寒基因的克隆及构建香菇表达载体.docx

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摘要：
为了探究结球白菜的抗寒机制，本研究采用反转录-聚合酶链式反应技术克隆以及构建了香菇表达载体。结果表明，通过筛选，最终找到了一个与结球白菜抗寒密切相关的基因，通过PCR扩增和酶切分析，将该基因成功克隆，并且将其插入了香菇表达载体之中，成功构建了香菇表达载体。本研究的结论对于进一步研究结球白菜的抗寒机制以及相关研究具有重要意义。
关键词：结球白菜；抗寒基因；克隆；香菇表达载体

结球白菜（Brassica oleracea var. capitata）是我国重要的蔬菜作物之一，由于其独特的味道和丰富的营养成分，备受消费者喜爱。然而，在生长过程中，结球白菜会受到一系列的环境胁迫因素的影响，其中，寒冷是其生长过程中面临的主要问题之一。因此，为了更好地发挥结球白菜的生长潜力，需要对其抗寒机制进行深入探究。


结球白菜品种：浙江紫球白
-聚合酶链式反应技术
通过试验，本研究采用CTAB法提取结球白菜基因组DNA，然后利用反转录-聚合酶链式反应技术（RT-PCR）进行PCR扩增和检测。

利用PCR扩增后得到的结球白菜基因进行酶切分析，采用限制性内切酶对目的基因进行酶切分析。

先将克隆得到的目的基因与香菇表达载体进行连接，并将Ligation产物转化到感受态大肠杆菌中，最后通过筛选和PCR检测确认成功构建了香菇表达载体。

-PCR结果分析
通过试验，从结球白菜基因组中成功提取了高质量的DNA，并进行PCR扩增和检测，结果表明，%的琼脂糖胶中，RT-PCR扩增后的条带清晰明显，符合预期。

经过PCR扩增，本研究成功得到了与结球白菜抗寒密切相关的基因， kb。进一步酶切分析结果显示，该基因能够被SmaI等限制性内切酶识别并切割，符合预期结果。

将PCR扩增获得的目的基因与香菇表达载体进行连接后，利用限制性内切酶以及PCR检测对Ligation模板进行筛选，最终确定成功构建了香菇表达载体。

本研究通过采用反转录-聚合酶链式反应技术，成功克隆了与结球白菜抗寒密切相关的基因，并成功构建了香菇表达载体。该基因的克隆以及香菇表达载体的构建为更深入研究结球白菜的抗寒机制提供了新的方向和基础。值得一提的是，通过本研究，可以建立更为全面的结球白菜抗寒机制研究模型，并在有限范围内对其生长和发育环节进行优化调节。

本研究通过对结球白菜的抗寒机制进行研究，成功克隆了与其抗寒性密切相关的基因，并利用香菇表达载体成功构建了表达向量，为该基因功能的更为深入的研究以及结球白菜的优化调节提供了新的思路和基础。