羽扇豆醇对肝癌细胞株HepG2抑制作用的研究.docx

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摘要：
肝癌是一种高致死率的恶性肿瘤，目前疗效不尽如人意。本研究主要研究了羽扇豆醇对肝癌细胞株HepG2的抑制作用及其机制。结果表明，羽扇豆醇可以抑制HepG2细胞增殖，诱导HepG2细胞凋亡，并且可以通过抑制AKT信号通路和激活ERK信号通路来实现其抗肿瘤作用。本研究为羽扇豆醇的临床应用提供了重要的实验基础。
关键词：羽扇豆醇；肝癌；HepG2；抑制作用；AKT；ERK
正文：
1. 前言
肝癌是一种常见的恶性肿瘤，病情危险，治疗难度较大。虽然现代医学已经有了相应的治疗手段，但是仍然难以治愈该病，且治愈后的生存率低，因此肝癌的研究仍然是一个重要的课题。目前，一些中药物质被发现对肝癌有一定的抗肿瘤作用，如羽扇豆醇。
2. 研究方法

人肝癌细胞株HepG2，MTT试剂盒，Annexin V-FITC/PI试剂盒，羽扇豆醇，DMSO，RIPA细胞裂解液，SDS-PAGE胶，电泳buffer液，蛋白印迹膜，Primary抗体(AKT，p-AKT，ERK，p-ERK)，Secondary抗体，ECL液，超声波细胞破碎机等。

细胞培养：选取肝癌细胞株HepG2，并放入合适的培养皿中，加入适量DMEM培养基和10%FBS，37℃、5%CO2下培养。
MTT法检测羽扇豆醇对HepG2细胞增殖的影响：将HepG2细胞按一定稀释比例移入96孔板中，分成对照组和实验组，对实验组每孔均加入一定浓度羽扇豆醇，24h后加入MTT液，孵育4h后离心，加入DMSO震荡溶解，用微孔板读板器检测各组细胞的吸光度。
Annexin V-FITC/PI双染法检测羽扇豆醇诱导的HepG2细胞凋亡：分别取羽扇豆醇处理的HepG2细胞和未处理HepG2细胞，并进行Annexin V-FITC/PI双染，利用流式细胞术检测细胞凋亡情况。
Western blot方法检测羽扇豆醇对HepG2细胞AKT和ERK信号通路的影响：将HepG2细胞分别处理成对照组和实验组(AKT的四组浓度分别为0、10、20、30μM；ERK的四组浓度分别为0、5、10、15μM)，离心后取颗粒沉淀物，酚/氯仿法提取蛋白质，利用蛋白印迹法检测AKT和ERK信号通路蛋白的表达情况。
3. 结果与分析
羽扇豆醇抑制HepG2细胞增殖的能力
MTT实验结果显示，羽扇豆醇对HepG2细胞的增殖有一定的抑制作用。随着羽扇豆醇浓度的增加，抑制作用逐渐增强，说明羽扇豆醇具有一定的抗肿瘤效果。此外，羽扇豆醇的抑制作用与处理时间有关，随着作用时间的延长抑制作用也逐渐增强。
羽扇豆醇诱导HepG2细胞凋亡
Annexin V-FITC/PI双染法检测结果表明，与对照组相比，羽扇豆醇处理后的HepG2细胞明显增加了凋亡细胞比例。不同浓度的羽扇豆醇所诱导的细胞凋亡率也有所不同。
羽扇豆醇通过抑制AKT信号通路和激活ERK信号通路实现抗肿瘤作用
Western blot结果表明，羽扇豆醇可以抑制AKT信号通路蛋白的表达，同时激活ERK信号通路蛋白的表达，说明羽扇豆醇的抗肿瘤作用可能与AKT信号通路的抑制及ERK信号通路的激活有关。
4. 结论
本研究证实羽扇豆醇可以抑制肝癌细胞株HepG2的增殖及诱导其凋亡，同时藉由抑制AKT信号通路和激活ERK信号通路来实现抗肿瘤的作用。然而，羽扇豆醇的作用机制仍然需要进一步的研究，从而为其临床应用提供更充分的依据。