免疫细胞的分离技术.ppt

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2025/2/13
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免疫细胞
1、概念
直接参与免疫应答及与免疫应答相关的所有细胞。
2、分类
＊单核吞噬细胞系统：单核细胞 / 巨噬细胞
树突状细胞〔DCs)
＊淋巴细胞系统：T 淋巴细胞 〔Th / Tc)
B 淋巴细胞
NK 细胞
＊粒细胞系统: 中性粒细胞
噬酸性粒细胞
噬碱性粒细胞
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免疫细胞的别离
人外周血单个核细胞的别离
淋巴细胞的别离
免疫细胞亚群的别离
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细胞别离原理
细胞的大小和比重
细胞外表标志
细胞黏附于各种物质外表的特性
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一、人外周血单个核细胞的别离 ——Ficoll分层离心法
人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC): Monocyte、Lymphocyte。
原理：血液中各细胞成分的比重不同，经离心沉淀，即可在分层液与血浆之间获得比较纯的单个核细胞，其中淋巴细胞占90%以上。
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不同细胞密度不同 红细胞和多形核白细胞  单个核细胞  分层液
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一、人外周血单个核细胞的别离 ——Ficoll分层离心法Ficoll分层液：蔗糖聚合物+泛影葡胺，+。
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二、淋巴细胞的别离
尼龙棉柱法
E花环别离法
补体细胞毒法免疫荧光法
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二、淋巴细胞的别离 ——尼龙棉柱法
原理：B细胞和单核细胞具有易黏附的特性，将淋巴细胞悬液加至尼龙纤维柱上，37 ℃作用1~2h后，洗脱的为非黏附性的T细胞。
PBMC
尼龙纤维棉柱
B细胞
单核细胞
T细胞
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二、淋巴细胞的别离 — E花环别离法〔纯化T细胞〕
原理
＊成熟T细胞外表有绵羊红细胞受体〔E受体，CD2分子〕，可和SRBC形成E花环，B细胞那么无。
＊ E花环比重大，沉淀，经别离液别离来。
＊ E花环周围的绵羊RBC可 用低渗法除去。
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