小鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE) 酶联免疫分析 试剂盒使用说明书.pdf

小鼠卵清蛋白特异性 IgE(OVA sIgE)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
产品编号:E0720m



本试剂盒仅供体外研究使用!

预期应用
ELISA 法定量测定小鼠血清、血浆或其它相关液体中卵清蛋白特异性 IgE(OVA sIgE)含量。

实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中 OVA sIgE 水平。用纯化的抗体包被
微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 OVA sIgE 抗原、生物素化的抗小鼠 OVA
sIgE 抗体、HRP 标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化
下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 OVA sIgE 呈正相
关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板:一块(96 孔)
2. 标准品(冻干品):2 瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml,盖好后静置 10 分钟以上,
然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为 100 ng/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释 100
ng/ml,50 ng/ml,25 ng/ml, ng/ml, ng/ml, ng/ml, ng/ml,样品稀
释液直接作为标准浓度 0 ng/ml,临用前 15 分钟内配制。如配制 50 ng/ml 标准品:取
100 ng/ml 的上述标准品加入含有 样品稀释液的 Eppendorf 管中,混匀即可,其余
浓度以此类推。
3. 样品稀释液:1×20ml/瓶。
4. 检测稀释液 A:1×10ml/瓶。
5. 检测稀释液 B:1×10ml/瓶。
6. 检测溶液 A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液 A 1:100 稀释,稀释前根据预先计
算好的每次实验所需的总量配制(每孔 100ul),实际配制时应多配制 -。如 1ul
检测溶液 A 加 99ul 检测稀释液 A 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液 B:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液 B 1:100 稀释。稀释方法同检测溶
液 A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释 25 倍。
10. 终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
标本的采集及保存
1. 细胞培养物上清:请离心后收集上清,并将标本保存于-20℃,且应避免反复冻融。
2. 血清:标本请于室温放置 2 小时或 4℃过夜后于 1000 x g 离心 20 分钟,取上清即可检测,
或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
3. 血浆:可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂,标本采集后 30 分钟内于 2 - 8° C 1000 x g 离心 15
分钟,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,