小鼠硫氧还蛋白还原(TrxR)酶联免疫分析试剂盒使用说明书.pdf

小鼠硫氧还蛋白还原酶( TrxR)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
预期应用
ELISA 法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中硫氧还蛋白还原酶
(TrxR)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中 TrxR 水平。用纯化的抗体包被微孔板,
制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 TrxR、生物素化的抗小鼠 TrxR 抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝
色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 TrxR 呈正相关。用酶标仪
在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板:一块( 96 孔)
2. 标准品(冻干品): 2 瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml,盖好后静置 10 分钟以
上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为 100 ng/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释成 50
ng/ml ,25 ng/ml, ng/ml, ng/ml, ng/ml, ng/ml, ng/ml,样品稀释
液直接作为标准浓度 0 ng/ml,临用前 15 分钟内配制。
如配制 50 ng/ml 标准品:取 100 ng/ml 的上述标准品加入含有 样品稀释液的
Eppendorf 管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液: 1×20ml/瓶。
4. 检测稀释液 A:1×10ml/瓶。
5. 检测稀释液 B:1×10ml/瓶。
6. 检测溶液 A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液 A 1:100 稀释,稀释前根据预
先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔 100ul),实际配制时应多配制 -。如 1ul
检测溶液 A 加 99ul 检测稀释液 A 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液 B:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液 B1:100 稀释。稀释方法同检测
溶液 A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释 25 倍。
10. 终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
标本的采集及保存
:请离心后收集上清,并将标本保存于-20℃,且应避免反复冻融。
:标本请于室温放置2 小时或 4℃过夜后于 1000 x g 离心 20 分钟,取上清即可检测,
或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
:可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂,标本采集后 30 分钟内于 2 - 8° C 1000 x g 离心 15
分钟,或将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。
每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试
剂盒的检测范围。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔