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细胞凝集
陈倩倩(1**********)
同作者:赵松、谢雨后、郑梦璐
2012年2月27日
1,摘要
凝集素是指一类专性识别糖基并与之非共价地、可逆地结合的蛋白质和糖蛋白,在自然界中分布广泛,目前在几乎在所有动植物中都有发现。凝集素能够提高动植物的免疫防御机制,还关系到细胞识别和信息传递。为了了解凝集素的浓度以及细胞浓度对细胞凝集是否有影响,又有怎样的影响,我们设计了三组实验,将兔子的血细胞和凝集素分别分为三个浓度相互,结果发现在细胞浓度一定时,凝集素浓度越高,细胞凝集的程度越高,相反,在凝集素浓度一定时,细胞浓度越高,凝集的程度越低。由此可见,细胞凝集程度受到细胞浓度和凝集素浓度的影响。
关键词:凝集素、浓度梯度、兔血细胞
2,背景
早在100多年前人们就发现了细胞凝集素的存在,从1888年研究发现蓖麻种子的蛋白提取物能凝集血红细胞,到1908年Gugot在大肠杠菌中找到凝集红细胞的凝集素,至今细胞凝集素已经在各种生物体内发现。人们根据来源不同将其分为动物凝集素、植物凝集素和微生物凝集素。植物凝集素素中又有人根据氨基酸序列的同源性及进化上的关系分为:豆科凝集素、几丁质凝集素、单子叶甘露糖结合凝集素、Ⅱ型核糖体失活蛋白、木菠萝素(Jacalin) 家族、葫芦科韧皮部凝集素、苋科凝集素。
凝集素的生理作用很普遍。凝集素能够决定微生物与寄主发生关系,各类病原菌如沙门氏菌、链球菌、弧菌、衣原体、拟杆菌等,它们的凝集素是感染寄主的毒力决定子。植物凝集素在种子成熟和萌发过程中可作为储藏蛋白,还可以促进有丝分裂,抵御细菌、真菌病毒等的入侵。凝集素在动物生理活动中涉及一些水生动物的幼体幼体附着和变态行为,此外再无脊椎动物中,凝集素是识别异己的工具。
近些年来凝集素的研究和运用已经涉及到各个领域。在农业上凝集素可以有效的杀死昆虫和高等捕食者;在医学上,凝集素能够作为肿瘤诊断和鉴定的工具;在生物学研究方面,凝集素既可以用于分离纯化,也可用于糖链的检测。
虽然凝集素的研究由来已久,并在各个领域得到广泛的应用,然而凝集素的生理功能,尤其是比例占绝大多数的植物凝集素的生理功能和在细胞能功能定位知之甚少。所以对于凝集素的研究仍然任重道远。
3,材料和方法
试剂:
土豆
2%兔血红细胞悬液
PBS缓冲液,
工具、仪器:
移液管、离心管、离心机、载玻片,显微镜等
土豆切片后,取2g放入10mlPBS中浸泡2小时。土豆凝集素将会溶解于溶液中。梯度稀释制备不同浓度(1X, 和 0X)的土豆凝集素悬液。
的兔静脉血,加3ml的生理盐水,1000r/min离心5min,弃上清。
4. 将细胞沉淀中悬浮于4ml生理盐水,制成2%细胞悬液。通过系列稀释,将血细胞制成三种不同浓度( , 1 and 2%)的悬液。
5. 按照如下表一所示,用移液管取一滴凝集素或PBS于载玻片凹坑内,加上一滴红细胞悬液,漩摇混合。10min后于显微镜下观察
RCB lection
1X

0X
2%
A1
A2
A3
1%
B1
B2
B3
%
C1
C2
C3
4,结果
如下图所示
图表 11正常细胞
图表12 A组图片

图表 13 B