生化实验技术专题
主要内容和要求:以蛋白质分离纯化为例介绍生物大分子分离纯化的一般步骤和注意事项;介绍层析技术、电泳技术、离心技术的原理及其应用;总结蛋白质、核酸、酶、氨基酸测定的主要方法。
目录
第一节生物大分子物质的制备
第二节几种主要的生物化学实验技术
第三节生物分子的检测
第一节生物大分子物质的制备
例:宇佐美曲霉537酸性蛋白酶的纯化
材料的选择和处理
确立测定方法
细胞的破碎
有效成分的抽提
有效成分的浓缩
生物大分子分离纯化的一般步骤
层析法
电泳法
超离心法
超滤
盐析(硫酸铵盐析)
等点电沉淀
有机溶剂沉淀
透析
│←前处理→│←粗分级→│←细分级→│
材料选择与处理
细胞破碎(机械破碎、溶账和自溶、酶解、化学处理)
生物组织→无细胞提取液→粗产品→
→结晶
几种主要沉淀方法比较
调整硫酸铵溶液饱和度计算表
注意事项
宇佐美曲霉537酸性蛋白酶的纯化
纯化步骤总蛋白总活力比活力纯化倍数回收率
(mg) (U) (U/mg蛋白) (%)
1、粗酶液 80 4320 54 1 100
2、乙醇沉淀 29 3585 123 83
3、醋酸钙沉淀 21 2980 141 69
4、盐析 4 1771 464 41
5、丙酮沉淀 1 1166 1104 27
6、结晶 130 1072 3
(chromatography)
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