煤矿生产安全事故报告和调查处理PPT培训课件.ppt

植物DNA的提取与纯度鉴定
谢艳
实验七
实验目的
实验原理
实验材料
实验试剂
实验仪器
实验步骤
注意事项
实验目的
了解植物总DNA提取的原理
学习和掌握提取、纯化高等植物总DNA的方法和步骤
核酸的理化性质
DNA和RNA都是极性化合物,一般都溶于水或1mol/L的NaCl溶液中,不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。核酸的钠盐比游离酸易溶于水,RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA在水中为10g/L,呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中,DNA、RNA易水解,在中性或弱碱性溶液中较稳定。
天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在。 DNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。DNP在低浓度盐溶液中,几乎不溶解, mol/L的氯化钠中溶解度最低,仅为在水中溶解度的1%,随着盐浓度的增加溶解度也增加,至1mol/L氯化钠中的溶解度很大,比纯水高2倍。
背景知识 1
背景知识 4
不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同,分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法,以获得可用的DNA大分子,尤其是组织中的多糖和酚类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时,应考虑除去多糖和酚类物质。
提醒
真核细胞基因组提取的方法
浓盐法
离子去污剂法
苯酚抽提法
水抽提法
CTAB法
DNA提取基本方法:
1. 机械法破碎细胞
2. 去除蛋白质,酚类等细胞内杂质污染
3. 纯化DNA
CATB法的简析
冷冻和研磨,使细胞破裂
加入CTAB提取缓冲液,溶解DNA
氯仿/异戊醇抽提,去除蛋白
加入无水乙醇/异丙醇,沉淀DNA
酒精冲洗,去除剩余杂质
RNase消化,去除RNA
无菌水/TE溶解,保存DNA
CTAB法实验原理
离子型表面活性剂如十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide,简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)等可以有效裂解植物细胞壁,且与DNA形成可溶于高盐溶液的复合物,当降低盐浓度时DNA又可沉淀析出,从而与蛋白质及多糖等分离。