乳铁蛋白对大鼠成骨细胞增殖及igf-1igf-1r mrna表达的影响.docx

乳铁蛋白对大鼠成骨细胞增殖及 IGF-1/IGF-1R mRNA
表达的影响
中文摘要目的: 研究不同浓度的乳铁蛋白对体外培养的原代成骨细胞增殖影响及对 IGF-1/IGF-1R 基因表达的影响,探讨乳铁蛋白抗骨质疏松的分子机制,为临床用药提供实验依据。方法:(1)采用胰酶和Ⅰ型胶原酶混合酶消化法分离获得原代成骨细胞;采用“差速贴壁法”进行纯化。光镜下观察细胞的形态结构和生长状况,通过碱性磷酸酶染色和Ⅰ型胶原免疫组化染色 SABC 法对细胞进行鉴定。(2)取第二代成骨细胞,
用不同浓度的乳铁蛋白(0 、、1、10、100、1000ug/ml)干预成骨细胞,在 1、 3、5、7 天后,用噻唑蓝比色法(MTT)测定增殖;实时荧光定量聚合酶链反应法
(Real time-PCR)检测其对胰岛素样生长因子(IGF-1)及其受体(IGF-1R) 基因的表达水平。结果:(1)镜下观察所获得的细胞具有成骨细胞的典型特征,细胞多为单核,呈三角形、多边形、长梭形等形态,并伸有粗大伪足;碱性磷酸酶染色及Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性。
(2)MTT 结果显示低浓度()组与对照组比较,差异无统计学意义
(P>)。1ug/ml、10ug/ml、100ug/ml、1000ug/ul 组均能促进成骨细胞增殖, 与对照组比较,在不同的时间差异有统计学意义(P<),其中 10ug/ml、 100ug/ml、1000ug/ul 组差异具有显著统计学意义(P<)。随着时间的推移, 不同浓度的 LF 使成骨细胞的数量增加,其中 100ug/ml 组在第 7 天细胞增殖数目达到最大。
(3)RT-PCR 结果显示与对照组相比,10ug/ml、100ug/ml、1000ug/ml 组 IGF-1mRNA 表达量有增加,在不同的时间差异有统计学意义(P<),其中 10ug/ml、100ug/ml 组差异具有显著统计学意义(P<)。在时间方面,随着时间的推移,不同浓度的 LF 使成骨细胞 IGF-1mRNA 表达量呈增加趋势,与对照组相比,各浓度组在第 5、
7 天 IGF-1mRNA 表达量有增加,具有显著统计学意义(P<)。
(4)RT-PCR 结果显示与对照组比较, 10ug/ml、100ug/ml、1000ug/ml 组 IGF-1R mRNA 表达量有增加,在不同的时间差异有统计学意义(P<),其中 10ug/ml、 1000ug/ml 组差异具有显著统计学意义(P<)。在时间方面,随着时间的推移, 不同浓度的 LF 使成骨细胞 IGF-1R mRNA 表达量呈增加趋势,与对照组相比,各浓度组在第 3、5、7 天 IGF-1R mRNA 表达量有增加,差异具有统计学意义(P<), 其中各浓度组在第 5、7 天差异具有显著统计学意义(P<), 结论:(1)采用胰酶和Ⅰ型胶原酶混合酶消化法体外分离成骨细胞,在采用多次“差速贴壁法”可以获得数量多且纯,并且活性很好的成骨细胞。
(2)乳铁蛋白能促进大鼠成骨细胞增殖,并且能提高 IGF-1/IGF-1R mRNA
的表达,可能是乳铁蛋白防治骨质疏松的机制之一。
关键词:原代培养; 大鼠; 混合酶消化法; 乳铁蛋白; 成骨细胞;IGF-1;
IGF-1R;碱性磷酸酶; MTT 法; 实时荧光定量 PCR; 骨质疏松
The effects of lactoferrin on proliferation、differentiation
and expressions of IGF-1/IGF-1R mRNA in rat primary osteoblasts
ABSTRACT
Objective : To investigate the effects of lactoferrin on proliferation and expressions of IGF-1/IGF-1R mRNA in rat primary osteoblasts.
Methods : Osteoblasts were separated by multienzyme digestion methods from the cranial bones of 6 newborn SD rats cultured. Lactoferrin of the concentrations of 0 、、1、10、100、1000ug/ml were administrated into the culture medium for 1、3、5、7 days. The proliferation of osteoblast